利用GC-MS对刺梨中敌敌畏和甲胺磷的检测进行分析

蒋洪亮李跃红赵阳张馨允陈露徐梦怀游元丁李志冉茂乾焦彦朝

(1.贵州省六盘水口岸服务中心，贵州 六盘水 553000；2.贵阳海关综合技术中心，贵州 贵阳 550001)

刺梨(Rosa roxburghiiTratt)为蔷薇科多年生落叶灌木缫丝花的果实，果实含有丰富的维生素C，被称为“维C之王”，是滋补健身的珍果，是一种药食两用的稀有果实[1,2]。现代药理学研究表明，刺梨具有解毒、镇静、促进胃肠蠕动、促进消化液分泌、抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、保肝、调节机体免疫功能、延缓衰老等作用[3,4]。刺梨产业作为六盘水市经济转型发展的重点工程，其种植得到大力推广，故农药的使用不可避免，农药残留的检测一直是产品质量安全工作中非常重要的一个领域，因此，农药残留的检测对确保刺梨及其产品的质量安全尤为重要。本文研究提取温度和提取时间对刺梨中甲胺磷和敌敌畏的加标回收率的影响，为六盘水刺梨及其产品中农药残留的检测及分析提供实验数据基础。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂、器材

1.1.1 材料

刺梨(贵州六盘水)，刺梨粉粹密封，冷藏备用。

1.1.2 试剂

甲胺磷，标准号：GBW(E)082285；批号：A1909238；100μg·mL-1，1.2mL。敌敌畏，标准物质：GBW(E)082244；批号：A2002073；100μg·mL-1，1.2mL。乙腈、无水硫酸钠、氯化钠、丙酮、甲苯均为分析纯，购于国药集团。

1.1.3 器材

GC-MSQP2010(岛津)；DB-1701毛细管柱(30m×0.25μm×0.25mm Agilent)；ST-16R离心机(赛默飞世尔上海)；梅特勒天平(北京卓信宏业)；刀式研磨仪GM200(德国莱驰)；数显型多管式旋涡混合器(上海安谱)；氮吹仪(上海沃珑)；NH2固相萃取柱(Agela)。

1.2 试验方法

1.2.1 样品加标处理

1.2.1.1 制样

取5g刺梨粉碎样，于50mL离心试管A、B、C、D中，B、C、D离心试管中加入5.0mL丙酮溶剂和140μL 10μg·mL-1的甲胺磷、敌敌畏标准物质溶液，充分摇匀后，把A、B、C、D离心试管中的溶剂挥发至干燥。

1.2.1.2 样品提取

在A、B、C、D离心试管中分别加入2.0g氯化钠和15mL乙腈，A、B、C、D离心试管在25℃条件下，分别在数显型多管式旋涡混合器上震摇1min、3min、10min后，将A、B、C、D离心试管放于离心机中以3000r·min-1离心5min，取其上清液，再重复上述操作2次，乙腈用量分别为15mL和10mL，合并3次提取上清液。并在30℃、35℃、40℃、45℃和50℃条件下分别进行上述提取过程[5]。

1.2.1.3 上清液净化

在Cleanertpesticarb/NH2固相萃取柱中加入厚度约为2cm的无水硫酸钠，用乙腈∶甲苯为3∶1的溶液5.0mL预洗柱，用5.0mL乙腈洗淋，当硫酸钠粉末上液体将淋洗完时，迅速将柱子移至氮吹试管上，将上清液加入柱内，用5.0mL乙腈润洗，收集所有洗脱液，并在30℃水浴下用氮吹仪把洗脱液吹至近干。加入2.0mL丙酮复溶，用移液枪把2.0mL样液移至2个进样瓶中，放于冰箱中冷藏，以备用于气相色谱-质谱测定。

1.2.2 标准工作溶液配制

精准吸取10μg·mL-1的标准混合储备液100μL和50μL于2个进样瓶中，再向2个进样瓶中分别加入900μL、950μL的丙酮溶剂，配成1.0μg·mL-1和0.5μg·mL-1的工作液；精准吸取1.0μg·mL-1的工作液100μL和200μL于2个进样瓶中，加入900μL和800μL的丙酮溶剂，配成0.1μg·mL-1、0.2μg·mL-1的工作液；精准吸取0.5μg·mL-1的工作液100μL于1个进样瓶中，加入900μL的丙酮溶剂，配成0.05μg·mL-1的工作液，得标准工作液系列浓度为0.05μg·mL-1、0.10μg·mL-1、0.20μg·mL-1、0.50μg·mL-1、1.00μg·mL-1。

1.2.3 色谱条件色谱柱

DB-1701(30m×0.32mm×0.25μm)；升温程序为90℃保持1min，以10℃·min-1的速率升至290℃，保持2min；进样口温度为280℃；进样量为1μL；进样方式为不分流进样，1.5min后打开阀；载气为高纯氦气；流速为1.2mL·min-1。质谱电子轰击源为70eV；GC-MS接口温度为280℃；离子源温度为250℃；溶剂延迟时间为4.5min；MS开始时间为5min；MS结束时间为15min；采集模式为Scan和MRM数据扫描。

2 结果与分析

2.1 甲胺磷、敌敌畏标准曲线

以甲胺磷、敌敌畏浓度为横坐标，丰度为纵坐标绘制标准曲线，得到敌敌畏的回归直线方程：

y=4194725.541782x-12306.754835(R2=0.999592)

甲胺磷的回归直线方程：

y=2878692.901818x-65263.976675(R2=0.994676)

标准曲线在浓度范围内线性良好[6]。

2.2 甲胺磷、敌敌畏标准品的色谱图

1.0μg·mL-1的甲胺磷、敌敌畏标准品溶液通过气相色谱-质谱联用仪检测，色谱图结果如图1。刺梨加标样经乙腈提取、固相萃取柱净化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮复溶、过滤，加标样液通过气相色谱-质谱联用仪检测，色谱图结果如图2。由图1、2可知，在该条件下敌敌畏和甲胺磷峰型良好、响应强度高、基质效应影响小[7,8]。

图1 标准物质色谱图

图2 加标样色谱图

2.3 实验数据结果

按提取时间和提取温度对敌敌畏和甲胺磷不同实验组进行编号，编号见表1。

表1 实验组编号

刺梨加标样分别在25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃下，经乙腈分别提取1min、3min、10min，固相萃取柱净化，氮吹至近干，加入2.0mL丙酮复溶、过滤，GC-MS检测，回收率数据结果见表2。

表2 加标回收率结果

2.4 单因素分析

2.4.1 提取温度对回收率的影响

提取温度对回收率的影响结果见图3至图5。

图4 提取3min时，温度对回收率的影响

图5 提取10min时，温度对回收率的影响

由图3至图5可知，在提取时间相同条件下，在25～45℃，刺梨加标样中敌敌畏、甲胺磷的回收率随着温度的升高有显著的提高；45℃之后，敌敌畏的回收率随温度的升高趋于平缓，甚至会下降，其中甲胺磷的回收率随着温度的升高有明显的下降。这可能是因为45℃之前，随着提取温度的升高，溶剂分子热运动加剧，分子扩散速度增加，溶剂分子更容易通过刺梨的细胞壁等，敌敌畏、甲胺磷越来越多的进入溶剂中；45℃之后，不同农药对热的稳定性不同，甚至有些农药随着温度的升高降解很明显。

2.4.2 提取时间对回收率的影响

提取时间对敌敌畏、甲胺磷回收率的影响结果如图6、7。

图6 时间对敌敌畏回收率影响

图7 时间对甲胺磷回收率影响

由图6、7可知，在提取温度相同的条件下，提取时间在1～3min，随着提取时间的延长，刺梨样品中敌敌畏、甲胺磷的回收率有显著的提高；3min之后，随着提取时间的延长，刺梨中敌敌畏、甲胺磷的回收率总体呈上升趋势。

3 结论

通过提取温度及提取时间的变化对刺梨样品中敌敌畏、甲胺磷加标回收率的影响进行分析。结果表明，采用气相色谱-质谱联用对刺梨样品中敌敌畏、甲胺磷进行检测时，提取温度和提取时间对检测结果有显著影响；提取时间相同条件下，提取温度在45℃范围内，提高温度有助于提高检测结果的准确性，但温度过高反而降低检测结果的准确性；提取温度相同条件下，延长提取时间有助于提高检测结果的准确性，但结合检测效率及耗能等，提取时间10min较为合适；尤其是对检测要求较高的食药材而言，选择适当提高温度和提取时间是很有必要的。