猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及鉴定

秦义娴，刘 丹，高金源，周飞燕，吴华伟*

(1. 中国兽医药品监察所，北京100081； 2. 武汉科前生物股份有限公司，武汉 430070)

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和各日龄猪只呼吸道疾病为特征的病毒性传染病[1]。该病自1987年在北美首次报道以来[2]，已蔓延至大部分国家和地区，给全球养猪业造成极大经济损失，我国也不例外。

PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，基因组为不分节段的单股正链RNA，全长约15 kb，包含10个开放阅读框(ORFs)，其中ORF5、ORF6和ORF7分别编码病毒的主要结构蛋白GP5、M和N[3]。GP5蛋白作为病毒的主要糖基化结构蛋白，具有较好的免疫原性，能够诱导机体产生中和抗体，而且其诱导的抗体中和能力强于GP4诱导产生的抗体[4-5]。GP5与M蛋白可形成GP5/M异源二聚体，对病毒装配起重要作用，并介导病毒吸附宿主细胞过程[6-7]。此外GP5蛋白又是PRRSV变异最大的结构蛋白，基因1型与2型间GP5的氨基酸序列相似性为52%～57%，同型毒株间氨基酸序列相似性为88%～99%[8-9]。这些都使得GP5蛋白成为发展新型疫苗和诊断试剂的良好候选蛋白。本研究以原核表达系统成功表达了NADC30-like毒株PRRSV 46D的GP5蛋白，并对其进行鉴定与纯化，以期为下一步GP5单克隆抗体的制备奠定物质基础。

1 材料与方法

1.1 细胞、毒株、表达载体 Marc-145细胞、PRRSV 46D(NADC30-like毒株)、pCold-TF表达载体，均由中国兽医药品监察所保存。

1.2 主要试剂 Rossetta (DE3)、Top10感受态细胞购于博迈德生物；病毒RNA提取试剂盒，质粒小提试剂盒购于北京天根生物公司；BamH I、Hind Ⅲ、T4 DNA连接酶、KOD酶高保真PCR试剂盒、反转录试剂盒、DNA Marker、Protein Marker购于TaKaRa公司；……