ST细胞全悬浮培养的驯化及其培养伪狂犬病毒的工艺研究

漆世华，韩 兴，秦红刚，李晶梅，熊 亮，秦 伟，谢红玲，郑良益，石宝兰，冯 钊，徐新星

(国药集团动物保健股份有限公司，武汉 430075)

伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的一种重要传染病[1]。其中猪伪狂犬病在我国普遍流行，疫苗接种是预防和控制该病的有效手段。目前均采用转瓶工艺生产猪伪狂犬病疫苗[2]，劳动强度大，生产效率低。生物反应器悬浮培养工艺具有生产效率高、操作简单、可自动化控制等优点，正在成为当前生物制品研发生产的主流技术[3]。

ST细胞为猪睾丸传代细胞系，对多种病毒敏感，如猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和伪狂犬病毒(PRV)等，已经应用于猪瘟疫苗的生产[4]。但ST细胞是贴壁依赖性细胞，悬浮培养需要采用微载体悬浮技术[5]，工业化放大受到了其贴壁性能的限制，操作繁琐。为利用生物反应器大规模生产伪狂犬病疫苗，本研究驯化建立了全悬浮培养的ST细胞系，并优化了全悬浮培养的ST细胞培养伪狂犬病毒的工艺参数。

1 材料和方法

1.1 细胞、病毒和培养基 ST细胞、伪狂犬病毒C株为国药集团动物保健股份有限公司保存；DMEM/F12培养基为Hyclone公司产品；STP无血清培养基为深圳壹生科生物科技公司的产品；新生牛血清为内蒙古金源康公司产品。

1.2 质粒和转染试剂 Siat7e基因真核表达质粒为Genecopoeia公司产品，货号:EX-V1581-M98；转染试剂Lipofectamine 3000和G418为Invitrogen公司产品。

1.3 主要仪器设备 摇床为美国精骐公司产品；7 L、50 L生物反应器,购于广州齐志生物工程设备有限公司。……