参麦注射液通过下调miR-106a保护肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧-复氧损伤的分子机制

黄真珍，王培琦，李 冰，李晓媛

0 引 言

肾缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤是外伤、手术切除和肾移植过程中的常见问题，长时间的缺血导致不可逆的肾损害[1]。I/R损伤的发病机制涉及细胞内钙超载、氧化应激、微循环障碍等多种病理过程，其中细胞凋亡导致的肾小管上皮细胞功能丧失在肾I/R损伤中起重要作用[2]。因此，如何有效预防肾小管上皮细胞凋亡对防治肾I/R意义重大。参麦注射液是由麦冬提取物和红参提取物组成的重要方剂，具有益气固脱、养阴生津之功效，广泛用于治疗心功能障碍[3]。研究发现，参麦注射液通过调控能量代谢途径能够抑制I/R诱导的异常心肌细胞凋亡在缺血性心肌病中具有保护作用[4-5]。微小RNA(microRNA，miR)-106a为miR-106a-363基因簇的成熟体miRNA，研究显示miR-106a在大鼠肾I/R损伤时表达上调，是评价急性肾损伤的潜在标志物[6]。PI3K/AKT通路参与调控细胞代谢、生长、增殖、凋亡等多种细胞过程，与肾I/R损伤的发生密切相关[7]。本研究通过构建缺氧复氧模型模拟I/R损伤，观察参麦注射液对肾小管上皮细胞NRK-52E增殖、凋亡的影响，并以miR-106a、PI3K/AKT通路为切入点探讨其保护机制，以期为参麦注射液用于肾I/R损伤提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验材料大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E购于武汉普诺赛生命科技公司；DMEM培养基、胎牛血清购于美国Hyclone公司；miR-106a模拟物(miR-106a mimics)及其阴性对照(miR-NC)、抑制物(anti-miR-106a)及其阴性对照(anti-NC)、PCR引物由上海生工公司提供；LipofectamineTM2000、放射免疫沉淀测定(radioimmunoprecipitation assay，RIPA)裂解液、Trizol试剂、microRNA逆转录试剂盒购于美国Invitrogen公司；参麦注射液购于杭州正大青春宝药业有限公司；……