龙鹿胶囊通过SIRT1/eNOS 信号通路对糖尿病大鼠勃起功能障碍的影响

夏雨果 陈 秋 高 坪 曾文彤 张蜀武

1. 成都中医药大学附属医院泌尿外科（四川成都 610072）；2. 成都中医药大学附属医院内分泌科（四川成都 610072）

由糖尿病诱发的勃起功能障碍称为糖尿病勃起功能障碍（diabetes mellitus erectile dysfunction,DMED）[1]，其发病率逐年升高，成为影响男性性功能的重要因素，目前治疗效果欠佳， 中医药对DMED 有独特疗效，本文研究龙鹿胶囊对DMED 大鼠勃起功能的影响并探讨其作用机制，为中医药治疗DMED 提供理论基础。

材料与方法

一、实验动物及主要试剂仪器

本动物实验通过成都中医药大学附属医院伦理委员会批准，SPF 级雄性SD 大鼠 （约6-7 周龄， 体重200-350 克）购自成都达硕实验动物公司；龙鹿胶囊原药购自天津和治药业集团有限公司。 实时荧光定量仪（ThermoFisher，美国），STZ、焦碳酸二乙酯（DEPC）（sigma， 美国），Trizol （invitrogen 公司），SYBR Premix Ex Taq II Kit、PrimeScript RT reagent Kit （宝生生物工程大连有限公司），Sirt1、β-actin 引物 （上海生工合成）；大鼠NO、SOD、MDA Ellisa 检测试剂盒 （上海茁彩生物科技有限公司），Sirt1、eNOS、β-actin 抗体（美国Affinity 公司），BCA 蛋白浓度测定试剂盒 （南京凯基生物公司），ECL 发光试剂盒 （美国Thermo 公司）， 蛋白Marker （美国NEB 公司），PVDF 膜 （美国Hybond 公司）；浓缩型DAB 试剂盒、羊抗兔二抗（北京中衫金桥生物有限公司）， 大鼠ICP/MAP 测定使用BL-420 生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司），免疫组化采图及分析使用Image-Pro Plus 6.0 （美国Media Cybernetics 公司）。

二、DMED 大鼠模型的建立

6-7 周龄70 只雄性SD 大鼠适应性饲养1 周后，测大鼠随机血糖作为基线， 由电脑随机排位抽取10 只大鼠作为正常组， 余60 只作为实验组。 实验组腹腔注射60mg/kg STZ 诱导1 型糖尿病，正常组大鼠注射等量的生理盐水， 注射后7 天取大鼠尾静脉血测定随机血糖，以血糖＞16.7mmol/L 作为糖尿病成模标准[2]，未成模的大鼠补注射1 次STZ， 注射浓度为30mg/kg， 注射后3天再按以上标准筛选模型。……