芪地糖肾方对高糖诱导足细胞自噬相关因子表达的影响

王琳 赵丽 魏慧丽 赵俊峰 安志超 谢惠迪 郭燕 宿家铭 柳红芳

(1北京中医药大学东直门医院，北京 100700；2河南省中医院)

糖尿病肾脏病(DKD)是全球导致终末期肾病的主因〔1〕，其治疗以降低尿蛋白为主，而足细胞损伤引起的蛋白尿是DKD进展的关键。芪地糖肾方(QDTS)(专利号：201711097315.2)由北京中医药大学东直门医院柳红芳教授依据明代医家张介宾“真阴精气”学说为理论基础并结合多年临床经验拟创而成〔2〕。QDTS针对DKD 蛋白尿的临床疗效颇佳〔3,4〕。研究证明QDTS可激活db/db小鼠肾脏自噬相关营养感知信号通路，调控自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62、Beclin1等表达起到保护小鼠肾脏的作用〔5,6〕，本研究探讨QDTS对高糖诱导足细胞自噬相关因子表达的影响及其作用机制。

1 材料与方法

1.1实验材料 实验药物：QDTS冻干粉(原药材购自北京中医药大学东直门医院)。实验细胞：小鼠足细胞MPC5(东直门实验室刘伟敬老师团队馈赠)。主要试剂和仪器：TRYPSIN 0.25%乙二胺四乙酸(EDTA、DMEM细胞培养基(无糖)、胎牛血清、青霉素-链霉素溶液购自Invitrogen公司；二甲基亚砜(DMSO)购自SIGMA公司；磷酸盐缓冲液(PBS)购自美国Solarbio公司；蛋白提取放射免疫沉淀试验(RIPA)裂解液、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂、蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)均购自Solarbio公司；移液器购自Eppendorf；兔多克隆抗体兔抗鼠LC3Ⅱ、P62、SIRT1一抗购自Abcam公司；电化学发光(ECL)显影剂购自Biorad；蛋白上样缓冲液购自普利莱。其他生化试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、多聚甲醛、过硫酸铵(APC)、水等均由北京中医药大学附属东直门医院实验中心提供。HDL洁净工作台：北京东联哈尔仪器制造有限公司；……