四氢嘧啶对酪氨酸酶的抑制作用机制及类型※

张 芳，张 鑫，杨海山，王志博，汪明香，沈国平，王 嵘，朱德锐

(青海大学医学院，基础医学研究中心，青海 西宁 810001)

有学者认为[1]，美白剂是通过抑制酪氨酸酶的活性，阻断黑色素的合成反应链，减少其在皮肤内的生成继而达到祛斑美白效果，但美白剂对酪氨酸酶的抑制作用机理及类型不明。本研究拟对四氢嘧啶(Ectoine)对酪氨酸酶的抑制作用机制及类型开展研究。

1.材料与方法

1.1 主要材料和试剂

Ectoine(纯度≥95%)购自德国Fluka Analytical公司；维生素C乙基醚(VC乙基醚)购自山东优索化工公司；海藻糖与熊果苷购自河北千汇生物公司；烟酰胺购自北京Solarbio科技公司；L-酪氨酸和酪氨酸酶(活力2.5*103U)购自合肥博美生物科技有限公司。JB/T-5374-1991型电子天平(精确率0.1mg)购自德国梅特勒-托利多公司；501型超级恒温水浴箱购自常州国华电器公司；Mili-Q Integral型纯水仪购自法国默克化工公司；754型紫外可见分光光度计购自上海光谱仪器有限公司。

1.2 研究方案

酪氨酸酶(Tyrosinase)是体内黑色素生物合成的关键靶点[2]。抑制剂通过抑制酪氨酸酶活力使黑色素颗粒生成减少从而达到美白功效。据此设计研究方案如下：用分光光度法测定不同质量分数的Ectoine及与美白剂复配时对酪氨酸酶活力的抑制率；之后固定L-酪氨酸浓度，加入不同活力的酪氨酸酶，测定不同质量分数Ectoine对酪氨酸酶催化L-酪氨酸氧化活力的影响，判断反应类型；再固定酪氨酸酶活力，改变L-酪氨酸浓度，考察不同质量分数Ectoine对酶活力的影响，以 Lineweaver-Burk双倒数作图法判断Ectoine的抑制类型。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液的配制