MAPK 4敲除对DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型的影响①

唐 琳 冒 灵 官 蔹 陈 静 周 涯陈 超 郭萌萌 赵娟娟 张继东 徐 林

（遵义医科大学免疫学教研室暨贵州省基因检测与治疗特色重点实验室，遵义563000）

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）的一种常见类型，是胃肠道的常见炎症疾病［1］。UC的临床症状为黏液脓血便、腹痛、体重减轻、精神萎靡、四肢无力等，其长期发展将会增加结直肠癌发病风险［2-5］。UC典型的发病年龄在20至39岁之间［6］。研究表明，UC的发病率每年都在提高［7］。目前，UC的病因和发病机制尚未完全阐明，因此进一步加强其发生机制的研究，对于认识UC的发生机理及临床治疗新靶点的开发均具有重要意义。

丝裂原活化蛋白激酶4（mitogen-activated protein kinase 4，MAPK4）是非典型MAPK家族成员的分子之一，参与机体多种生理、病理过程，如免疫应答、肿瘤生成等［8-10］。然而，MAPK4是否参与UC的发生发展仍未有研究报道。本文拟采用葡聚糖硫酸钠（dextran sulphate sodium，DSS）诱导的小鼠UC模型，观察MAPK4敲除后对小鼠UC病理损伤的影响，为后续探讨MAPK4在UC发生中的作用以及临床治疗新策略开发提供前期实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料 7～9周龄C57BL/6的SPF级雄性WT和MAPK4 KO小鼠购自The Jackson Laboratory（027666）；光学显微镜（Olympus）；HE染色相关试剂（北京中杉金桥生物技术有限公司）；DSS（MW 36000-50000；MP Biologicals）；C1000 Thermal cycler荧光定量PCR仪、S1000 Thermal cycler PCR仪、10%SDSPAGE试剂盒、凝胶成像系统（Bio-Rad）；RNAisoTMPlus、Prime Script RT Reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqⅡ（×2）（TaKaRa）；4%多聚甲醛、氯仿、异丙醇（重庆川东化工公司）；PCR引物（生工生物工程有限公司），序列见表1；兔抗鼠Gr-1一抗（Abcam）；DAB试剂盒、阿利新蓝染色试剂盒、抗体稀释液、甘氨酸、Tris、SDS（Solarbio）；TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA试剂盒（CUSABIO）；蛋白提取试剂盒（凯基生物技术股份有限公司）；3×loading buffer、DTT（Cell Signaling Technology公司）；封闭蛋白液（博士德生物工程有限公司）；PVDF膜、ECL超敏化学发光液（Merck Millipore公司）。……