miR-503-5p靶向VEGFA基因通过PI3K/AKT信号通路调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭

谢迎春 邓 丹 张玉梅 王 琴（贵州中医药大学第一附属医院妇科检查室，贵阳550001）

绒毛膜癌是女性常见的恶性肿瘤，多继发于葡萄胎、流产以后，少数发生于妊娠后［1］。绒毛膜癌的治疗主要采用手术切除和化疗，但手术治疗创伤大，而化疗副作用多［2］。寻找绒毛膜癌的新型分子治疗靶点一直是领域内的研究热点。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类小分子单链非编码RNA，在肿瘤的发生发展中起重要调控作用［3］。研究显示，miR-503-5p参与卵巢癌等肿瘤细胞的增殖和凋亡，是肿瘤治疗的潜在靶点［4］。目前，miR-503-5p对人绒毛膜癌细胞的调控作用及机制还未知。生物信息学软件预测显示，血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）是miR-503-5p的靶基因。VEGFA是促血管生长因子家族成员，参与肿瘤血管生成，在乳腺癌、胃癌、结直肠癌等肿瘤的发生发展中起重要作用［5-7］。本研究以miR-503-5p/VEGFA轴为切入点，探讨miR-503-5p对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制，以期为人绒毛膜癌的靶向分子治疗提供新靶点。

1 材料与方法

1.1 材料 人绒毛膜滋养层细胞HTR8/Svneo、人绒膜癌细胞系JEG-3、BeWo和JAR（中国科学院上海细胞库），胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）（浙江天杭生物科技股份有限公司），RPMI1640培养基（美国Gibco公司），四甲基噻唑蓝（methylthiazoletrazolium，MTT）和胰蛋白酶（美国Sigma公司），逆转录试剂盒和PCR试剂盒（北京天根生化科技有限公司），Trizol试剂和LipofectamineTM2000试剂盒（美国Invitrogen公司），PCR引物（上海生工生物工程有限公司），细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K）、磷酸化的蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）抗体（北京中杉金桥生物试剂公司），二喹啉……