miR-541-3p靶向SPOCD1基因通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭①

戴 睿 林 萍 宋精玲 周 莹 杨 耘 唐 莹

（昆明医科大学科技成果孵化中心电子显微镜室，昆明650500）

乳腺癌是女性最常见恶性肿瘤之一，早期以手术切除以及放化疗等传统方法为主，但易转移、易复发、易产生抗性和毒副作用大。新出现的靶向治疗特异性强，毒副作用小，成为乳腺癌新的治疗方法［1-2］。miRNA是一类内源性非编码RNA，研究发现其参与乳腺癌的生长和转移，也参与细胞耐药和抵抗等，可作为临床诊断、预后标志及有效的治疗靶点［3-5］。有研究报道miR-541-3p在非小细胞肺癌组织和血浆中下调表达，与TNM分期和术后生存期相关，过表达miR-541-3p通过靶向转化生长影响因子2（transform growth interacting factor 2，TGIF2）抑制非小细胞肺癌细胞的生长和转移［6］。还有研究发现miR-541-3p在神经病理性疼痛大鼠海马中下调表达［7］。包含1个基因的SPOC结构域（SPOC domain containing 1 gene，SPOCD1）是属于S-Ⅱ（TFⅡS）家族的转录因子，有研究报道SPOCD1在胃肿瘤中过表达，敲除SPOCD1减少了胃癌细胞增殖，迁移和侵袭，以及裸鼠中异种移植肿瘤的生长［8］。SPOCD1在人咀嚼黏膜伤口愈合期间显著上调表达［9］。然而miR-541-3p和SPOCD1在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响尚未阐明。本实验旨在研究miR-541-3p和SPOCD1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及miR-541-3p是否通过调控SPOCD1影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

1 材料与方法

1.1 材料 正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、T47D、Bcap-37购自美国菌种保藏中心（ATCC）；胎牛血清、RPMI1640培养基、荧光定量PCR试剂盒购自美国Thermo Fisher Scientific公司；RIPA蛋白裂解液、二辛可宁酸（bicinchoninic acid，BCA）试剂盒购自上海纯优生物科技有限公司；MTT试剂盒、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin VFITC）和碘化丙锭（PI）试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京Solarbio公司；……