缺氧诱导的UCHL5 增强宫颈癌Hela 细胞辐射抗性

焦圣元 高巧慧 达飞 郭利 王晋 郭娟 李静 刘军 叶

空军军医大学军事预防医学系辐射防护医学教研室，西安 710032

宫颈癌是在全球女性疾病中普遍存在的、发病率和致死率最高的癌症之一[1]。放疗适用于各期宫颈癌的治疗，是局部晚期宫颈癌不可替代的治疗手段，而辐射抗性是导致宫颈癌放疗后局部复发和远处转移的重要原因。

缺氧导致的肿瘤辐射抗性是影响放疗疗效的重要因素，缺氧诱导因子α 家族（hypoxia-inducible factor-α family，HIFs）在其中发挥着关键作用。缺氧作为应激源可以调节去泛素化酶（deubiquitinase，DUB），泛素羧基末端水解酶L5（ubiquitin carboxylterminal hydrolase isozyme L5，UCHL5）是DUB 泛素羧基末端水解酶家族成员，它可影响肿瘤细胞的DNA 损伤修复[2]、周期调控[3]、凋亡[4]和增殖等生物进程。本研究旨在观察缺氧对宫颈癌Hela 细胞UCHL5 表达的影响，进一步探讨UCHL5 对宫颈癌Hela 细胞辐射敏感性的作用。

1 材料与方法

1.1 细胞系

人宫颈癌Hela 细胞和人肾上皮293T 细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所。

1.2 试剂及仪器

高糖DMEM 培养基、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、P8340 蛋白酶抑制剂Cocktail 和牛血清白蛋白均购自美国Sigma 公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；嘌呤霉素（Puromycin）购自美国Gibco 公司；MTT 购自上海索莱宝生物科技有限公司；11668-019 lipofectamine 2000、31985-062 Opti-MEM 和10296010 TRIzol™均购自美国Invitrogen 公司；Dual-Luciferase®Reporter Assay System E1910 报告基因检测系统购自美国Promega 公司。过表达UCHL5 组、过表达对照组、沉默UCHL5 组、沉默对照组慢病毒载体和聚凝胺（polybrene）均由上海吉凯基因化学技术有限公司构建；mRNA 提取试剂盒和Taqman mRNA 试剂盒均购自天根生化科技（北京）有限公司；G4507姬姆萨染液购自德国Merck 公司；……