聚乙烯醇联合藻酸钙与兔软骨细胞共培养对兔膝关节软骨缺损修复的影响

王晓希，赵晓萌 ，余向前，赵文国，李志强

随着现代骨科学的迅速发展，膝关节软骨损伤修复的方法、技术、设备不断完善。藻酸钙(CaAlg)三维立体支架是目前常见的软骨缺损填充物之一，对缺处的磨损有较好的修复作用[1-2]。CaAlg三维立体支架内培养的软骨细胞，对软骨细胞的增殖具有促进作用。本研究旨在以聚乙烯醇(PVA)与CaAlg为材料，结合支架内细胞培养技术[1]制作多孔的、可渗透的复合支架，探讨PVA联合CaAlg(PVA/CaAlg)与兔软骨细胞(ATDC-5)共培养对兔膝关节软骨缺损修复的影响，以及对胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的mRNA表达及Ⅱ型胶原分泌的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物清洁级4周龄新西兰白兔3只，体重0.9～1.1(1.0±0.1)kg，清洁级成年新西兰白兔20只，体重2.9～3.1(3.0±0.1)kg，雌雄不限。实验动物由华北理工大学实验动物中心提供(批准号:GB/T35823-2018)。动物在实验前适应性饲养1周，自由饮食和摄水，每天光照12 h，环境温度21～23(22±1) ℃。

1.2 材料与试剂PVA(聚合度为97%，百灵威科技有限公司)、胎牛血清(Gibco公司)，Ⅱ型胶原酶I抗(北京博奥森生物技术有限公司)，通用型Ⅱ抗、PBS缓冲液、DAB显色剂(北京中杉金乔生物技术有限公司)，DMEM培养基(大连美伦生物技术有限公司)，青霉素-链霉素双抗、海藻酸钠、氯化钙[艾康生物技术(杭州)有限公司]，RT-PCR引物(爱康生物科技有限公司)，Trizol(Invitroge公司)，水合氯醛(洛阳市洛龙区豫科环试化工商店)，HE染色试剂盒[博苑生物科技(上海)有限公司]。

1.3 实验仪器与器械二氧化碳培养箱(三洋公司)，双人单面超净工作台SW-CJ-1BU(博迅医疗生物仪器股份有限公司)，电热恒温水浴锅(金坛市医疗仪……