猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在昆虫细胞中的可溶性表达

尹园英，高雁怩，夏婷婷，白娟，姜平

(南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室，江苏 南京 210095)

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道疾病的重要病原，给全球生猪养殖造成巨大经济损失[1]。目前，PRRSV商品疫苗尚不理想，该病仍严重影响我国养猪业的健康发展。

PRRSV为单股正链RNA病毒，分为欧洲型、美洲型2个基因型，同一基因型毒株中又有多种基因亚型。我国主要流行的美洲型毒株包括经典型、高致病性和NADC30样等基因亚型毒株。该病毒基因组全长约15 kb，编码16种非结构蛋白和8种结构蛋白[2]。其中，GP5是病毒的主要囊膜糖基化蛋白，其序列在各毒株之间变异较大，GP5蛋白大小约25 ku，含有A和B 2个重要抗原表位。B表位高度保守，可诱发中和抗体。A表位为非中和性表位[3]。GP5蛋白是PRRSV亚单位疫苗研究的重要靶标抗原。

为了提高PRRSV疫苗免疫保护广谱性和GP5蛋白表达效力，本研究根据我国流行的3种基因亚型PRRSV代表性毒株的GP5基因序列，设计合成了杂合GP5基因(xGP5m)，并用PCR方法在其前端分别添加TAT、ppTG20以及MPG 3种穿膜肽[4-6]，构建获得4株重组杆状病毒，获得了可溶性表达的GP5蛋白，证明其具有的较好抗原性。

1 材料与方法

1.1 主要材料

pFastBacTMDual表达系统和Lipofectamine 3000为Invitrogen公司产品。PRRSV阳性血清为本实验室制备保存。His单克隆抗体购自翼飞雪生物科技有限公司。SPA-HRP、羊抗小鼠IgG-HRP购自武汉博士德生物工程公司。Sf-900Ⅲ SFM无血清培养基为Gibco公司产品。Mini plasmid、DNA凝胶回收试剂盒、2×TaqMix均购自南京诺唯赞公司。限制性核酸内切酶购自Thermo Fisher公司。……