空肠弯曲菌多重毒力基因检测方法的建立

聂文芳,宋 清,腾 军,陈 伟

(合肥工业大学 食品与生物工程学院,安徽 合肥 230601)

0 引 言

空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)是人畜共生的食源性致病微生物,广泛分布于自然界中,其感染途径以食用生的、未熟透的禽肉和消毒不充分的牛奶为主[1-5]。人感染空肠弯曲菌后,最常见的会引起肠胃炎、腹泻、发烧以及腹部绞痛,并伴随有反应性关节炎、肝炎、瑞特氏病和格林-巴利综合征等免疫性损伤性疾病[6-9]。世界卫生组织已将空肠弯曲菌引起的肠炎列为最常见的传染病之一,我国国家食源性疾病监测网也将弯曲菌列为监测对象。

细胞溶涨毒素(cytolethal distending toxin，CDT)是目前空肠弯曲菌分泌表达的唯一细胞毒素,cdt基因簇由cdtA、cdtB、cdtC串联组成,且cdtB在细胞毒素的分泌过程中起着决定性的作用。空肠弯曲菌作为引起腹泻的主要细菌之一,建立有效的快速检测空肠弯曲菌毒力基因的方法已经成为控制该类感染性疾病的关键。传统的检测方法不仅耗时费力、且成本高,不适用于现场检测[10-12]。

目前用于检测空肠弯曲杆菌的方法主要有聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、ELISA、RT-PCR、PCR-ELISA和多重PCR等[13-22],其中适合大批量样品检测及血清学调查的主要是ELISA和RT-PCR方法。然而,现有的ELISA方法还不能对空肠弯曲杆菌肠炎做出准确的诊断,RT-PCR方法虽然可以对空肠弯曲杆菌准确检测,但是由于其操作复杂,需要特异的引物、昂贵的实验仪器设备和专业的实验人员而不能适应现场快速检测的要求。

本研究提出了胶体金免疫层析试纸条结合 PCR预扩增的方法,利用双修饰的引物经预扩增后得到两端带有识别物的双链分子:一端与金标抗体结合;另一端再与试纸条上的检测线结合显色。……