miR-205促进hASCs细胞系向软骨细胞方向分化的作用及机制研究

李春亮，秦 凤，韩雪来，齐普良，孙凯华，赵子春，唐保明，李泽清，李钊伟，王 凯

外伤或疾病引起的关节软骨缺损或损伤是临床常见病，关节软骨损伤后自我修复能力十分有限。人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells，hASCs)具有向脂肪、软骨等多向分化潜能及分布广泛、易取材等优势，已成为软骨组织工程理想的种子细胞。核心结合因子α-1(core-binding factor α-1，Cbfα-1)是hASCs向软骨细胞分化、肥大成熟过程中重要的特异性转录调控因子，寻找Cbfα-1相对应的基因启动元件进而调控该基因表达，对hASCs细胞的分化至关重要。研究证实，微小RNA(microRNA，miRNA)可通过靶向调控Cbfα-1介导多能干细胞成骨或软骨分化，其中miR-205在调节多能干细胞成骨分化过程中起重要作用，且可抑制Cbfα-1蛋白表达。目前，关于miR-205对hASCs软骨细胞分化的调控作用研究较少。为获得可稳定向软骨细胞方向分化的hASCs细胞，该研究采用慢病毒转染法将miR-205转染入hASCs细胞，观察过表达miR-205对hASCs细胞增殖、软骨细胞方向分化的影响及调控机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

细胞

hASCs购自澳赛尔斯生物技术(上海)有限公司。

1.1.2

主要试剂和仪器 含miR-205序列的重组慢病毒载体(Lenti-miR-205)、阴性对照Lenti-control慢病毒载体(由上海基凯基因化学技术有限公司测序及慢病毒包装)，病毒滴度为1×10CFU/ml；Lenti-miR-205、Lenti-control慢病毒液(深圳市默赛尔生物医学科技发展有限公司);兔抗人Cbfα-1、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、信号传导蛋白3(signal transduction protein 3，Smad3)、II型胶原(type Ⅱ collagen，ColⅡ)多抗、辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG(美国R&D Systems公司)；BCA蛋白定量试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司)；EL×800酶标仪(美国BioTek公司)；7900实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)；E-Gel Imager凝胶成像仪(美国Invitrogen公司)。……