疟原虫厚血膜改良染色效果研究

吴莲凤，吴程力，王霄霞（.温州医科大学附属第一医院医学检验中心，浙江温州35000；.温州医科大学仁济学院，浙江温州35000）

疟疾是严重危害人类健康的寄生虫病之一，与艾滋病、结核病一起被WHO列为全球三大公共卫生问题。据WHO报道，2019年全球仍有87个国家和地区流行疟疾，有2.29亿新发病例，约40.9万人死于疟疾［1］。随着国际交流及出国旅行等不断增多，导致境外感染输入疟疾较常见。疟疾不仅严重危害我国人民的身体健康和生命安全，也对巩固我国消除疟疾成果构成严重威胁。血涂片镜检法既是WHO推荐的疟原虫检测金标准，也是我国基层医疗机构和疾控部门最直接、最常用的检测方法［2］。特别是在厚血膜上镜检疟原虫，因其疟原虫数量多、分布密集、检出率高成为血涂片镜检疟原虫的重要环节。但是目前使用的厚血膜法操作较繁琐，且经常出现血膜脱落、溶血不彻底、影响虫体形态等问题，在很大程度上影响了临床疟原虫的检出。因此，我们对厚血膜染色法做了一定程度的改良，其操作简单、效果佳，现与同行分享。

1 材料与方法

1.1 实验材料 新鲜EDTA-K2抗凝外周血，疟原虫阳性的新鲜EDTA-K2抗凝外周血，洁净玻片，瑞吉染液（珠海贝索公司），瑞氏染液（自配），吉姆萨染液（自配），蒸馏水、缓冲液（6.64 g/L磷酸二氢钾、6.45 g/L磷酸氢二钠，pH 6.6～6.8）及Nikon ECLIPSE 50i型光学显微镜。

1.2 实验方法

1.2.1 选择最适稀释比例染液 将瑞吉染液和缓冲液按1∶3、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20比例配制成待用染液。用加样枪取疟原虫阳性新鲜EDTA-K2抗凝血5μL，滴加在干净玻片上并制成直径约为1 cm左右、厚薄均匀的圆形厚血膜，每组按照不同稀释比例分别制作3张，血膜充分干透后，分别加入上述比例待用染液，染色30 min后用蒸馏水轻轻将染液冲走，晾干玻片待检。……