miR-711在介导结肠癌干细胞生物学行为恶化中的作用

闫军 周高晋 马博

结肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一，中晚期病人疗效不佳，预后差。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在肿瘤转移、侵袭及预后中发挥重要的作用，与结肠癌细胞的恶性生物学行为密切相关[1]。肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSC)是肿瘤复发、侵袭、转移及耐药的根源，已在多种恶性肿瘤中发现CSCs的存在[2]。研究发现，多种miRNAs参与调控结肠癌干细胞的恶性生物学行为[3]。miR-711是最近发现的一种miRNA，在多种恶性肿瘤组织中低表达[4-6]。研究发现，过表达miR-711能抑制SGC-7901胃癌细胞的干性指标SOX2的表达，同时抑制与肿瘤耐药相关的基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达[7]。我们从TCGA及Metabolic gEne Rapid Visualizer等数据库分析显示，结肠癌组织中miR-711低表达，正常结肠组织中高表达。但是miR-711是否可影响结肠癌干细胞的侵袭、转移及EMT过程目前尚不清楚。本研究分析miR-711对结肠癌干细胞的侵袭、转移、增殖及EMT过程的影响。

材料与方法

一、主要试剂、细胞株及仪器

人结肠癌细胞株HT-29、Caco-2、HCT116、LOVO和HCT8(上海生命科学研究所)。miR-711 mimics、miR-NC对照质粒(上海生物工程公司)；兔抗人E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-actin多克隆一抗、鼠抗兔单克隆二抗(Jackson公司，美国)；FITC-CD44单克隆抗体、PE-CD133单克隆抗体(Abcam公司，美国)；Western Blot试剂盒，RNA提取试剂盒，转染试剂盒(上海碧云天生物公司)；MTT试剂盒(Kapa Biosystems，美国)；二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)、Transwell小室、PCR试剂盒(Sigma公司，美国)；酶标仪(上海仪电分析仪器有限公司)；ABI 7900PCR扩增仪(上海仪电分析仪器有限公司)；FACS流式细胞仪(BD Biosciences，美国)。

二、方法

1.细胞培养：含10% FBS和青、链霉素各100 U/L的RPMI1640培养基，常规培养于37 ℃，5% CO2培养箱。待细胞铺满培养瓶后，用0.25%胰酶消化，制备单细胞悬液，使用无血清培养基继续培养，定期更换培养基、传代。……