肽基精氨酸脱亚胺酶4在类风湿关节炎中的表达及意义

庞春艳，常志芳，王馨，白力，王永福,

(1.包头医学院第一附属医院 风湿免疫科,内蒙古 包头 014010;2.内蒙古自治区自体免疫学重点实验室,内蒙古 包头 014010)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性炎症为主的自身免疫性疾病，肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidyl arginine deiminase 4，PAD4)能将体内蛋白质中的精氨酸残基转变为瓜氨酸残基，而瓜氨酸化在RA的发病中起着重要作用，瓜氨酸化可打破机体的免疫耐受、激活自身免疫反应。因此，PAD4是亚洲人群RA的易感基因，在RA患者的滑膜中表达增高，它能促使RA发病以及加速病程进展[1]。本研究主要分析RA患者PAD4蛋白和mRNA的表达水平以及RA患者PAD4蛋白的表达水平与类风湿因子(rheumatoid factor，RF)、抗环瓜氨酸肽(cyclic citrunilated peptides，CCP)抗体和28个关节的疾病活动度评分(the disease activity score using 28 joint counts，DAS28)的相关性，探讨PAD4对RA的诊断和治疗价值。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

ELISA试剂盒购自美国BIOMATIK公司和德国的欧蒙公司，逆转录试剂盒(RvertAid First Strand cDNA Synthesis)和PowerUpTM®SYBR Green Master Mix购自美国Thermol Fisher公司。

1.2 血清中PAD4、RF-IgM和抗CCP抗体的检测

收集90例RA患者和76例健康对照者的血清，-20 ℃保存备用。RA患者的年龄为(56.68±12.45)岁，其中男性占24%；健康对照者的年龄为(54.38±9.91)岁，其中男性占16%。两组在年龄和性别方面差异无统计学意义(P>0.05)。特种蛋白仪检测RA患者血清中RF-IgM的表达水平。ELISA法检测血清中PAD4、RF-IgA、RF-IgG和抗CCP抗体的表达水平。PAD4的检测按BIOMATIK公司的ELISA试剂盒说明书进行操作，方法如下：加100 μl标准品或血清，37 ℃孵育1 h；吸出液体，加100 μl检测试剂A，37 ℃孵育1 h；吸出液体，洗涤3次；加100 μl检测试剂B，37 ℃孵育30 min；吸出液体，洗涤5次；加90 μl底物，37 ℃孵育15 min；加50 μl终止液，450 nm读取吸光度值；根据标准曲线计算样本浓度。RF-IgA、RF-IgG和抗CCP抗体按欧蒙公司的ELISA试剂盒说明书进行操作，方法如下：加100 μl标准品或100倍稀释后的血清，室温孵育1 h；吸……