正交试验设计探索小鼠不同组织冰冻切片的优化制备方法*

房彬彬 孙 立 刘 芬 罗俊一 杨 宁李艳红 王 黎 田 婷 杨毅宁

(1.新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院，省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐 830054)(2.新疆医科大学第一附属医院冠心病一科，乌鲁木齐 830054)(3.新疆医科大学第一附属医院医学检验中心，乌鲁木齐 830054)

冰冻切片因其快速、简便、较好的保存抗原活性及酶类等优点[1]，在病毒转染效率分析、油红O染色、免疫荧光等实验中具有不可替代的优势，目前被广泛应用于临床病理快速诊断和科学研究中[2-4]。在医学科研工作中，实验标本多来自于动物模型，如小鼠、大鼠、兔、犬等，其中尤以小鼠最为普遍[5]。但是在制片过程中，由于各种组织中所含水分的不同、质地软硬的差异以及组织中形态结构和成分的多样性等因素[6-7]，如运用相同的固定、脱水、包埋等方法，常出现组织过度收缩或肿胀、过脆无法制片、冰晶形成过多、脱片等问题[8]，导致组织细胞形态发生明显改变[9]，严重影响冰冻切片的质量及结果的判读。为此，本研究选择小鼠常规器官组织，探索各组织在冰冻切片制备过程中的最佳固定、脱水方法，切片温度以及切片厚度，为高质量冰冻切片的制备提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1实验动物取材：昆明小鼠，雌性，3只，购自新疆医科大学实验动物中心，实验动物使用许可证号：SYXK(新)2018-0003，分别取心、肝、脾、肾、大脑、主动脉及腓肠肌。

1.1.2仪器设备：Leica CM1950冰冻切片机和Leica DM 3000显微镜。

1.1.3试剂及耗材：OCT冷冻切片包埋剂美国樱花SAKURA、苏木素染色液(ZLI-9610)及伊红染色液(ZLI-9613)均购自北京中杉金桥公司；……