NaHS对PD小鼠纹状体的保护作用及对MMP-9和caspase-1表达的影响

肖 莉，李丹凤，石清明，何 甜，李澜芯，聂 政

帕金森病（Parkinson's disease,PD）是一种多因素的神经退行性疾病，PD的病理特征是黑质及纹状体多巴胺（dopamin,DA）能神经元死亡和变性，其病因尚不清楚，除线粒体功能异常、氧化应激和α-synuclein蛋白的异常沉积外，神经炎症反应已被证实可触发和加重DA能神经元的变性[1-2]。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9，MMP-9)属于基质金属蛋白酶家族，MMP-9促进大脑炎性细胞（如小胶质细胞）的激活，而激活的炎性细胞又加重了DA能神经元的丢失[3-4]。半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)与炎症反应密切相关，caspase-1可以切割白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的前体，促进IL-1β 的成熟，IL-1β参与了帕金森病的发病过程[5-6]。硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)供体，在体内电离生成的HS-可与体内H+结合生成H2S，对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的PD小鼠DA能神经元损伤产生保护作用[7-9]。但其保护作用是否通过抑制MMP-9和caspase-1介导的神经炎症反应尚未明确。本研究通过构建小鼠PD模型，探讨NaHS对PD小鼠纹状体神经元的保护作用及其机制，对PD的治疗提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级KM小鼠30只，18～20 g/只，购自成都达硕实验动物有限公司。

1.1.2 主要试剂 NaHS（Sigma）；MPTP（aladdin）；羊抗兔IgG、GAPDH抗体（beyotime）；免疫组化试剂盒、caspase-1抗体、MMP-9抗体（boster）。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及PD模型制备 将30只KM小鼠随机分为病理组（MPTP组）、治疗组（MPTP+NaHS组）和对照组（control组），每组10只。对3组小鼠进行腹腔注射给药，病理组小鼠注射MPTP[30 mg/(kg·d)]，治疗组先注射NaHS[3 mg/kg·d）]，0.5 h后再注射MPTP[30 mg/(kg·d）]，对照组注射0.9%的生理盐水。 注射后观察并记录小鼠行为变化，连续注射1 w后取材。

1.2.2 取材 10%水合氯醛麻醉，开颅取脑分离纹状体，免疫印迹法检测MMP-9、caspase-1的表达。……