miR-449a 对体外培养脊髓神经元的影响

吴春妍，陈国娇，王琼仙，王利梅，苏茜茜，石兰岚

（1 昆明医科大学实验动物学部，云南 昆明；2 昆明医科大学基础医学院；云南 昆明）

0 引言

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病，患者多表现为功能丧失甚至是损伤平面下的完全瘫痪，致残率极高[1]。由于这种疾病恢复历程极其漫长，他们需要依赖多种医疗措施护理延长寿命，生活质量极差[2]。不仅如此，脊髓损伤的患者还要在整个疾病过程中承受多种渐进性并发症的折磨，比如心血管疾病、肠胃问题、慢性疼痛和抑郁等[3,4]。脊髓损伤后，损伤区域发生复杂的生理病理变化，而神经功能的恢复主要与轴突内生能力/微环境的营养因子与生长因子及瘢痕形成等有密切关系[5]，如何实现功能恢复，是国内外研究的重点和难点。本研究拟将miR-449a 转染脊髓神经元，通过体外培养观察miR-449a 对神经元的作用。

1 材料与方法

1.1 动物和材料

SPF 级新生24h 内的SD 乳鼠，由昆明医科大学实验动物学部提供。倒置显微镜（Nikon SMZ745）、miR-449a mimic、NC（广州锐博）、引物（成都擎科）、RT-qPCR反应试剂盒（DBI Bioscience）、DMEM/Neurobasal 培养基（Gibco）。终止消化，用5ml 吸管轻轻地吹打10次，静置2min，吸取上面的细胞悬液移入培养皿中，然后再向沉淀的组织团块加入培养基，重复上述吹打步骤，吸取上层细胞悬液，如此2-3次。滤网过滤，1000r/min 离心5min，弃上清，加入培养基重悬细胞，移入培养瓶置入37℃培养箱中30min 差速贴壁，收集未贴壁液体调整细胞密度至1×106个/孔，将细胞接种到6 孔板中，每孔2ml，将培养板放入37℃、5%CO2孵箱内孵育[6-8]。每3d 半量换液1次。

1.2.2 细胞转染