丁苯酞联合肢体缺血后处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用#

阳昀 程超 张冲 唐园燕 廖小明 周茜

（桂林医学院第二附属医院神经内科，广西 桂林 541199）

2009年，Ren等人首次证实肢体缺血后处理（Limb ischemic postconditioning，LPostC）可减轻脑缺血再灌注损伤[1]。自此，随着研究的深入这一结论被众多国内外学者证实[2]，且由于其安全、操作简单易于推广，因此具有广阔的临床前景。本课题前期研究发现LPostC通过抵抗氧化应激、减轻血脑屏障损伤和抑制凋亡来发挥保护作用[3-5]。在多种动物模型及临床研究中，丁苯酞（Dl-3-n-Butylphthalide，NBP）均被证实具有改善脑缺血再灌注损伤效果[6-8]，现已作为我国急性缺血性脑卒中诊治指南推荐用药。但目前未见NBP联合LPostC治疗缺血性脑卒中的相关报道。本实验拟探讨NBP联合LPostC对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，以期为临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器

丁苯酞胶囊（石药集团恩必普药业有限公司），DAB显示试剂盒、Caspase-3兔多克隆抗体和Caspase-9兔多克隆抗体（碧云天生物技术公司）、SOD、MDA检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），DD-2型双极电凝器（北京东方神健医疗器械有限公司），752型紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）。

1.1.2 动物与分组

SPF级雄性SD大鼠75只，体重250～280 g（由桂林医学院动物实验中心提供）。随机分为假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、肢体缺血后处理组（LPostC组）、丁苯酞（Dl-3-n-Butylphthalide，NBP）后处理组（NBP组）和同时予NBP+LPostC的联合后处理组（NL组），每组15只。

1.1.3 大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型制备及治疗

除假手术组外，所有大鼠均采用石蜡线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型，具体如下：SD大鼠经腹腔注射10%水合氯醛300 mg·kg-1麻醉后，游离左侧颈外动脉，用头端蘸有石蜡的鱼线（φ= 0.26 mm）从左侧颈外动脉插入，深度约18～20 mm，栓塞左侧大脑中动脉。……