TGF-β/miRNA/c-Ski在人冠脉内皮细胞中调控内皮-间充质转化的作用机制研究

韩素霞 吴晶晶 李景峰

(上海市浦东新区人民医院心内科，上海 201299)

冠脉内皮细胞于特定病理状态下能往间充质细胞不断转化，表型和功能也会随之出现变化，即内皮-间充质转化(End-MT)。据有关研究显示[1]，End-MT的异常活化引发胞外基质(ECM)合成增多从而促使心肌纤维化出现，抑制End-MT可对心肌的纤维化进展产生一定抑制作用。c-SKI属于Sloan-Kettering逆转录病毒内所分离得到，其中c-SKI原癌基因编码核蛋白，能对转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路起到负性调控作用，有着生物多效性[2]。以往研究发现c-SKI能对成纤维细胞表型产生调控作用，进而具备抗纤维化特性，但有关c-SKI于End-MT内作用研究较少[3]。转化因子-化(TGF-β)属于EndMT中关键性的启动因子，据有关研究显示，微小DNA(miRNA)对于EndMT过程中有着调控作用[4]。本文就TGF-β、miRNA以及c-Ski于人冠脉内皮细胞调控内皮-间充质转化的作用机制开展分析，以期为心肌纤维化预防及治疗提供出新策略。

1 资料与方法

1.1一般资料 人冠脉内皮细胞由美国ScienCell公司提供；TGF-β1为R&D System提供；带有绿色荧光蛋白c-SKI慢病毒载体(湖南赢润生物技术有限公司)；Smad2以及Smad3均由Cell Signaling Technology提供；抗E-钙黏蛋白(E-ead)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3与GAPDh抗体均由Thermo Fisher提供；抗c-SKI、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与波形蛋白(vimentin)抗体由Abeam提供；TRIzoI RNA试剂盒为TaKaRa提供。

1.2细胞培养和感染 人冠脉内皮细胞在培养基内开展培养同时加10%的胎牛血清、100 U/mL青霉素与100 μg/mL链霉素，于5%CO2、95%O2潮湿培养箱内进行37°C培养，培养到汇合状态，后选取0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合液充分消化和传代，到2-5代可用于实验。等到细胞融合至70%左右能换成无血清培养基进行6 h饥饿，后开展细胞感染。……