辣椒上TRV 介导的番茄斑萎病毒N 基因沉默体系构建及鉴定*

李慧芳，桂 敏，张萍萍，张美玲，李永忠，刘雅婷

(1.云南农业大学 农学与生物技术学院，云南 昆明 650201；2.云南农业大学 植物保护学院，云南 昆明 650201；3.云南农业大学 烟草学院，云南 昆明 650201)

番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus，TSWV)属于番茄斑萎病毒科(Tospoviridae)正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)[1]，于1915 年在澳大利亚首次被发现[2]。其寄主范围广泛，可侵染80 多科1 000 多种植物[3-4]，在欧美、亚洲及大洋洲等多个地区广泛分布，造成严重的经济损失[3,5-6]，已被列为世界十大农业病害之一[7]。近年来，TSWV 在中国云南、贵州和广西等地流行发生，严重危害当地番茄、辣椒、烟草和花卉等农业生产的健康发展[4,8-9]。TSWV 是三分子基因组，包括L、M 和S 等 3 条RNA 链。S 链负链编码核衣壳蛋白(nucleocapsid protein，N)[4]，负责包裹病毒基因组RNA，参与病毒的多种生物学过程，其序列保守程度较高，作为本属病毒分类的重要依据[10]。N 蛋白能够与TSWV 的3个RNA 分子形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)[11]，且N 蛋白的单体之间可以互作形成N蛋白多聚体[12]，这一现象对于病毒RNPs 的组装非常重要。N 蛋白在病毒RNA 合成的早期起关键作用，可能参与病毒基因组复制和转录[13]。有研究表明：N 蛋白与病毒在寄主体内的长距离运输有关[14-15]。它可在植物细胞内形成高速运动的颗粒，并能够通过与微丝马达蛋白互作运动[16]。最新研究发现：在本氏烟上沉默N基因可使本氏烟抵抗TSWV[17]，但N基因在辣椒上的抗病研究还未见报道。

在植物宿主感染期间，病毒须克服宿主防御，RNA 沉默是一种高度保守的病毒防御机制。病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing，VIGS)是一种快速沉默目的基因、鉴定基因功能的反向遗传学新技术[18-19]，主要应用于植物的抗病基因以及与代谢和发育相关基因的研究[20]。……