白桦酯酸介导STAT3信号通路调控肝纤维化进程

朱 悦，高 璐，廉丽花，南极星，吴艳玲

(延边大学药学院，长白山天然药物研究教育部重点实验室，吉林 延吉 133002)

肝纤维化是一种可逆病变，主要表征为细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的过度沉积，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)受病毒性肝炎、酒精等因素刺激，由贮存视黄醇的静息态变为激活态，其活化与增殖是肝纤维化形成的主要标志[1]。因此，抑制HSCs活化是逆转肝纤维化的有效途径之一。信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)是STAT家族主要成员之一，作为应答IL-6等炎性因子的主要转录因子被首次发现，现被视为慢性炎症形成中不可或缺的关键分子[2]。受异常激活时，STAT3由细胞质转移至细胞核，进而参与细胞增殖、分化、免疫和炎症反应等[3]。白桦酯酸(betulinic acid，BA)，是由白桦树皮中分离获得一种五环三萜类物质，前期研究初步发现，BA可以改善由硫代乙酰胺诱导肝纤维化，但具体作用机制尚不明确[4]。基于STAT3生物学调控作用，本研究探讨BA介导STAT3信号通路改善肝纤维化的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞系肝星状细胞系HSCs和巨噬细胞系Raw264.7为韩国生命工学研究院(韩国大田)Jung-Joon Lee博士慷慨相赠。

1.2 药品与试剂白桦酯酸(Skyherb Technologies，98%)；小鼠IL-6 ELISA试剂盒(Neobio Science，42SH01)；ALT(A001)、AST(A002)试剂盒(长春汇力)；苏木精染液(Solarbio，517-28-2)；伊红染色液(BA4024)、Masson(BA4079B)试剂盒(Baso)；DMEM(C11965500BT)、FBS(900-108)、0.25% Try(15090046)购自Gibco BRL；DMSO(D2650)、青霉素/链霉素(I9532、V900929)、LPS(L2880)购自Sigma；Anti-α-SMA(ab5694)、Anti-collagen-1(ab34710)、Anti-MMP-13(ab75606)、Anti-TIMP-1(ab61224)、β-actin(ab8226)购自Abcam；Anti-TLR4(sc-293072)、Anti-p-STAT3(sc-8059)、Anti-STAT3(sc-8019)、Anti-p-LKB1(sc-271924)、Anti-LKB1(sc-374300)、Anti-AMPK(sc-398861)购自Santa Cruz；Anti-p-AMPK(CS-2531)购自Cell Signaling。

1.3 仪器化学成像发光显色仪(Tanon)；共聚焦扫描显微镜(Olympus)；数码倒置显微镜(Nikon)；全自动倒置电泳仪、转印电泳槽、电泳仪、转印电泳槽(Bio-Rad)；水平摇床、低温超速离心机、CO2培养箱(Thermo)；酶标仪(Bio Tek)；净化工作台(上海新范医疗器械有限公司)。

1.4 细胞培养HSCs和Raw264.7细胞分别用含有10% FBS和100 U·L-1的青霉素/链霉素的DMEM培养，在37 ℃、5%的CO2培养箱中进行传代培养。……