不同转染试剂包装慢病毒效果研究

唐 俊 孙雪娟 谭 翠

(1.重庆医科大学附属第一医院分子肿瘤及表观遗传学重庆市重点实验室 重庆 400016；2.重庆医科大学附属第一医院研究生管理处 重庆 400016)

细胞转染技术，是指人为地将外源性基因分子如DNA、RNA等导入真核细胞内的一种技术。随着细胞生物学和分子生物学的飞速发展及基因与蛋白功能的研究深入，转染已经成为实验室工作中经常涉及的基本实验方法。目前，细胞转染技术主要分为三类途径：物理介导、化学介导和生物介导。物理方法包括电穿孔法、显微注射和基因枪等；化学介导方法种类较多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术等；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染以及现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。与其他途径相比，慢病毒体系作为生物介导的方法之一，因其安全性高、免疫赦免小、可重复性强、能够携带大基因片段且可长期稳定表达等优点，被广泛应用[1]。慢病毒包装中常用的转染试剂有PEI、脂质体等。聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，因其可以缩聚DNA分子形成颗粒，常被用于真核细胞的转染。脂质体是磷脂分散在水中形成的脂质双分子层，又称为人工生物膜，可将DNA分子包裹在内形成DNA-脂复合物，适用于各种悬浮或贴壁细胞，转染效率较高。

本实验采用两种转染试剂PEI和LipoD293作为研究对象，将携带CMV启动子和绿色荧光蛋白GFP（green fluorescent protein）标记的慢病毒质粒包装成慢病毒液，通过对比观察包装及病毒液感染后，293T细胞中荧光蛋白表达强弱来比较两种脂质体的慢病毒包装效果，为慢病毒包装过程中转染试剂的选择提供实验依据。……