miR-26a调控PTEN基因降低小鼠慢性淋巴白血病细胞的耐药性

毛洪宾，何 明

(1.开封市人民医院 临床药学科，河南 开封 475000； 2.河南大学第一附属医院 临床药学科，河南 开封 475001)

慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是临床常见的一种白血病，以外周血淋巴细胞增高及骨髓成熟淋巴细胞浸润为主要特征[1]。患者在化疗过程中对药物的敏感性降低，继而产生耐药性，如何避免耐药现象出现是治疗CLL的关键[2]。微小RNA(microRNA)参与多种生理病理过程，与肿瘤细胞的化疗敏感性和耐药性有关，miR-26a能够调节化疗药物的敏感性[3]。第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN)是一种抑癌基因，其表达降低是肾癌预后不良的有效指标[4]。PTEN参与CLL细胞对氟达拉滨耐药，且miR-26a可通过调节PTEN表达参与肿瘤细胞生理病理过程，但两者在CLL耐药性中报道较少[5]。本研究通过观察miR-26a调控PTEN对小鼠L1210细胞系和小鼠耐顺铂(cisplatin，DDP)L1210/DDP细胞亚系耐药性的影响，探讨其可能作用机制，旨在为临床治疗CLL提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系：小鼠淋巴细胞白血病L1210细胞系(中国科学院上海细胞库)。小鼠耐DDP淋巴细胞白血病L1210/DDP细胞亚系(上海奥陆生物科技有限公司)。

1.1.2 药物、主要试剂：注射用DDP(山东齐鲁制药厂)；DMEM培养基和胎牛血清(FBS)(Gibco公司)；MTT试剂(Sigma Aldrich公司)；pcDNA-miR-26a-inhibitor质粒、pcDNA-miR-26a-inhibitor-NC质粒(广州锐博生物科技有限公司)；LipofectamineTM2000转染试剂(Invitrogen公司)；野生型和突变型PTEN重组质粒(上海生工生物工程股份有限公司)；兔抗小鼠PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol-3-kinase，PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine protein kinase，AKT)多抗、p-AKT多抗和山羊抗兔IgG-HRP(Abcam公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养及分组处理：将L1210细胞接种于质量分数10% FBS及1%青链霉素的DMEM培养基，于体积分数5% CO2培养箱内37 ℃常规培养；……