基于非洲猪瘟病毒CD2v基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

韩 玉，王 涛，潘 力，孙茂文，周萍萍，王 冰，王 翌，罗玉子，仇华吉，孙 元

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150069)

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一种高度接触性、广泛出血性的猪烈性传染病，死亡率可达100%。该病在撒哈拉以南非洲地区已经流行多年，在过去10多年中，主要在高加索地区和东欧地区流行，自2018年传入中国以来迅速蔓延至全国各地，并存在进一步扩大的风险，给养猪业造成了无法预估的经济损失[1-2]。

ASFV为非洲猪瘟相关病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的成员[3]，也是目前已知的唯一虫媒DNA病毒，主要通过病猪/带毒猪及其污染的产品与易感猪之间的直接接触或通过钝缘蜱属软蜱传播。ASFV具有严格的细胞嗜性，主要感染巨噬细胞(macrophages)和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)[4]。ASFV基因组为双链闭合线性DNA分子，不同分离株的基因组大小在170～194 kb之间，可编码160多种蛋白[3-4]。CD2v作为ASFV重要的囊膜糖蛋白，胞外域含有2个免疫球蛋白样结构域和信号肽，与淋巴细胞CD2蛋白高度同源，可将红细胞聚集在表达CD2v的细胞表面[5]。CD2v介导的ASFV与红细胞结合也有助于病毒在动物体内的扩散和免疫逃逸，但具体的分子机制目前未知。另外，目前已经鉴定出CD2v上存在4个T细胞表位区域，这表明在ASFV感染时诱导产生了针对CD2v蛋白的细胞免疫应答[6]。近几年研究表明，ASFV基因缺失减毒活疫苗是最有希望成功的一种疫苗，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所构建的7基因缺失病毒(MGF505-1R、MGF360-2R、MGF360-3R、MGF-360-12L、MGF505-13L、MGF505-14L和CD2v)能对中国流行的ASFV强毒株提供完全免疫保护，可作为有效防控中国ASF疫情的疫苗候选株[7]，由此可见，该疫苗候选株具有较好的研发和应用前景。……