捻转血矛线虫疫苗候选抗原H11亚型基因的序列结构及启动子活性分析

杨 怡，段丽君，张红丽，周前进，陈学秋，杜爱芳*

(1.浙江大学 动物科学学院 浙江省动物预防医学重点实验室，浙江 杭州 310058；2.宁波市海曙区畜牧兽医技术管理服务站，浙江 宁波 315000；3.浙江省动物疫病预防控制中心，浙江 杭州 310058；4.宁波大学 海洋学院，浙江 宁波 315211)

捻转血矛线虫(Haemonchuscontortus)寄生于牛、羊等反刍动物真胃，引起宿主贫血、营养不良甚至死亡[1]。目前该病的防治主要依赖抗虫药物的使用，但耐药性问题日益突出[2]，迫切需要研发新型绿色环保的防控措施[3]。疫苗研发是当前捻转血矛线虫病防控方法中热门的研究方向之一。捻转血矛线虫微粒体氨肽酶H11是现阶段最有效的疫苗候选抗原之一。H11天然提取物具有出色的抗虫效果[4-5]，但体外重组蛋白却不能诱导有效的免疫保护[6]，这可能与H11蛋白特殊的空间构象及存在多个亚型密切相关。

研究证实H11存在多种蛋白亚型，包括H11-1、H11-2、H11-3和H11-4等[7]。本实验室最先分离获得的H11(H11-3)亚型基因完整ORF为2 919 bp，编码972个氨基酸，基因组大小为14 959 bp，拥有25个外显子和24个内含子[8]；后续也获得了H11-4的ORF，大小为 2 916 bp，编码971个氨基酸[9]。研究发现，利用昆虫细胞与大肠杆菌表达系统获得的H11(H11-3)重组蛋白免疫山羊后，产生的抗体能与天然H11发生交叉反应，但免疫保护力低，不能提供针对捻转血矛线虫感染的有效保护，没有实际应用价值[10]。利用RNAi技术对感染性L3幼虫进行H11干扰处理，再感染捻转四矛线虫山羊粪便虫卵量减少57%、虫荷减少40%，这表明单一的H11亚型可能不能提供完全的免疫保护[11]，但是仍有作为疫苗候选抗原的潜力。……