长链非编码RNA LINC00665对小细胞肺癌增殖、侵袭的影响及其与miR-186-5p的调控关系

潘喜峰，马艳菊，唐域，赵舣航，于淼淼，王贺

中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院，沈阳 110042

肺癌包括小细胞肺癌（SCLC）与非小细胞肺癌（NSCLC），发病率与病死率较高［1］。随着表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂和免疫检查点抑制剂等药物成功用于临床，NSCLC患者的预后有了显著改善［2］，但是SCLC的相关研究较少。因此，对SCLC发生发展的分子机制进行更深入地研究与探索，寻找SCLC潜在治疗靶点，具有重要临床意义。长链非编码RNA（LncRNA）是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA，可通过表观遗传修饰［3］、LncRNA-miRNA相互作用［4］、LncRNA-蛋白相互作用等多种机制调控基因的表达［5］。LINC00665作为LncRNA的一员，在乳腺癌［6］、前列腺癌［7］中表达上调，能促进肿瘤细胞的增殖和侵袭转移，但是LINC00665在SCLC中的功能及作用机制尚不清楚。miR-186-5p在骨肉瘤［8］、结直肠癌［9］中表达显著下调，可通过调控下游的mRNA抑制肿瘤进展。通过StarBase数据库发现，miR-186-5p是LINC00665的潜在靶点。SHAN等［10］在肝细胞癌（HCC）中发现LINC00665可以介导miR-186-5p，从而抑制HCC细胞的凋亡和自噬。但是，二者在SCLC中是否也存在调控关系尚不明确。2019年5月—2021年1月，我们观察了LINC00665在SCLC细胞中的表达情况及其对肿瘤细胞增殖、侵袭的影响，并分析在此过程中LINC00665与miR-186-5p是否存在调控关系，为研究LINC00665在SCLC发病过程中的作用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞及试剂：SCLC细胞H1688和正常肺上皮细胞BEAS-2B均购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，逆转录试剂盒购于美国Invit‐rogen公司，胎牛血清购于美国Gibco公司，RPMI-1640培养基购于美国Gibco公司，BEBM培养基购于瑞士Lonza公司，TB Green Premix Ex TaqTMⅡ及PrimeScriptTMRT Master Mix均购于日本Takara公司，LINC00665过表达片段、LINC00665阴性序列片段、miR-186-5p过表达片段均购于上海吉玛制药技术有限公司，LipofectamineTM2000转染试剂盒购于美国Invitrogen公司。……