电针预处理对慢性炎性痛大鼠脊髓背角组织中mTOR-自噬通路活性的影响

吕丹，栾静，杨艳梅，贺永进

天津市第一中心医院，天津 300192

炎性痛广泛存在于各种急慢性疾病的进程中［1］，严重影响患者的生活质量。已有研究表明，电针对炎性痛具有抗炎、镇痛的作用［2-4］，但其具体机制目前尚不明确。本课题组前期工作表明，自噬通路障碍参与了大鼠炎性痛的形成和维持［5］。细胞通过自噬形成自噬体，进而利用溶酶体降解细胞质中的大分子物质和受损细胞器，对维持细胞形态结构、代谢和细胞功能的自身稳态有重要作用［6］。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路参与自噬的负调控过程，在相关信号调节中起关键调节作用。mTOR信号通路通过调控局部蛋白合成，对于慢性炎性痛所致的疼痛敏化起重要作用。目前，电针的抗炎镇痛作用是否通过调控mTOR-自噬通路完成尚无相关报道。2018年1月—2020年1月，本研究拟观察电针预处理对慢性炎性痛大鼠脊髓背角组织中mTOR-自噬通路的影响，为明确其抗炎镇痛作用机制提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要材料 健康成年雄性SD大鼠（体质量180～240 g，天津医科大学实验动物中心）32只，饲养于室温（22～26℃）、昼夜交替的环境中。主要试剂：蜜蜂毒和RIPA细胞裂解液（Sigma公司，美国）；自噬相关蛋白（LC3Ⅱ、Beclin-1、p62）及mTOR相关信号通路蛋白（mTOR、p-mTOR、S6K、p-S6K）一抗（Cell Signaling technology公司，美国）；二抗为HRP标记的山羊抗兔或鼠抗体（北京中杉金桥公司）；内参β-Tubulin一抗（Sigma公司，美国）。主要仪器：von-Frey纤维（Stoelting公司，美国）；电针治疗仪（G6805，上海涵飞医疗器械有限公司）；热刺激仪（RTY 3型，西安凤岚仪器厂）；低温离心机（Beckman公司L-90K，美国）；电泳仪和半干转膜仪（Bio-Rad公司Mini-Pro和Trans-Blot SD，美国）；……