富源某养殖场猪链球菌病诊断体会

晏 波，荀绍雄，李华高，付兆金，雷洪梅，潘 基，李方志

（1.富源县大河镇农业农村综合服务中心，云南富源 655000；2.富源县农业农村局动物疫病预防控制中心，云南富源 655000）

1 前言

富源县某养殖场2019年8月存栏数340头，母猪42头，仔猪172头，小肥猪126头。8月16日2头母猪高发病，体温41.2℃，8月17日突然死亡，未见任何症状。8月20日，仔猪突然死亡12头，小肥猪9头。8月21日至9月2日，陆续有有猪死亡，症状均不明显。经剖检，肝脏明显肿大，脾脏正常，肠系膜了针尖大小出血点，腹股沟淋巴结肿大、血性浸润，胸腔可见少量黄色渗出物。采集猪肾脏、脾脏、淋巴等组织样品编为病料1号，猪全血编为病料样品2号，送检云南农业大学动物健康检测与评价与评价云中心。

2 材料与方法

2.1 检测项目

猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病毒抗原、猪蓝耳病毒抗原。

2.2 检测方法

2.2.1 猪瘟病毒抗原检测。采取送检病料，用TAKARA试剂盒法提取样品中RNA，进行RT-PCR反转录成cDNA后，使用TAKARA公司rTaq，加入PCR扩增相应特异性片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪照像。

2.2.2 猪伪狂犬病毒抗原检测。采取送检病料，采用TaKaRa DNA提取试剂盒提取样品组织中的DNA，加入PCR 扩增相应特异性片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪照像。

2.2.3 猪蓝耳病毒抗原检测。采取送检病料，用TAKARA试剂盒法提取样品中 RNA，进行RT-PCR反转录成cDNA后，使用TAKARA公司rTaq，加入PCR扩增相应特异性片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像。

3 结果

3.1 猪瘟病毒抗原结果

目的条带大小为：272bp，本次检测结果未检出猪瘟病毒抗原。

3.2 猪伪狂犬病毒抗原结果

猪伪狂犬病毒目的条带：343bp，本次检测结果病料未检出猪伪狂犬病毒抗原。

3.3 猪蓝耳病毒抗原结果

猪蓝耳病毒目的条带：835bp，本次检测结果病料1和病料2均未检出猪蓝耳病毒抗原阳性。

4 结果分析

结果表明检测的猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病毒抗原为阴性、猪蓝耳病毒抗原均为阴性。3种需检测的结果均为阴性，进行梳理后，做猪链球菌检验。细菌初培养：严格的无菌操作下剪切组织病料，放入营养肉汤的EP管中，在37℃摇床培养过夜。细菌的鉴别培养：取菌液划线接种于兔血液琼脂培养基，37℃过夜培养后观察菌落形态，革兰氏染色后镜检。检测结果：1号细菌并未出现溶血；2号细菌在血平板上生长良好，并出现浅灰色、圆整湿润的露滴样优势菌落，周围有溶血现象，革兰氏染色后镜检后观察到球状阳性菌，判定为链球菌。结论：经培养鉴定以及镜检判断，样品中链球菌阳性。

5 结语

该养殖场之所以出现链球菌病，导致巨大的经济损失，甚至面临清场，其原因有下列几个方面：（1）该养殖场管理混乱，档案不齐全，生产区、生活区，管理区三位一体。（2）环境卫生极差，生物安全控制基本为零。（3）基础免疫虽然做了，但对非洲猪瘟防控意识不到位。（4）没有基本的消毒设施，保险公司查勘理赔人员任意进出养殖场，病原微生物带进养殖场内在所难免。