酵母双杂交筛选与星状病毒衣壳蛋白ORF2互作的宿主蛋白

李香雨，于漫，聂梓陶，陈彦如，王嘉会，韩喜彬，赵微

（锦州医科大学基础医学院实验动物学教研室，辽宁 锦州 121200）

星状病毒是引起婴幼儿及免疫缺陷人群腹泻的重要病原体，发病率仅次于轮状病毒，常与其他肠道病毒混合感染，造成患儿严重腹泻甚至死亡［1］。由于星状病毒属于食源性和医院获得性病原体，常呈现群体爆发感染，严重危害公共卫生安全［2-3］。

星状病毒为星状病毒科无囊膜、单股、正链RNA病毒。人星状病毒（human astrovirus，HAstV）具有8个传统的血清型（HAstV 1～8）及3种新的亚型（MLB型、VA型及HMO型）［4］。其中，HAstV-1型在婴幼儿群体中感染最为普遍［5］。HAstV基因组编码非结构蛋白nsP1a（编码3C-like 丝氨酸蛋白酶）、非结构蛋白nsP1b（编码RNA依赖性的RNA聚合酶RdRp）和结构蛋白ORF2（编码病毒衣壳蛋白）3种蛋白。ORF2蛋白主要决定了细胞的嗜异性，并能够刺激宿主细胞产生应答，是参与调控细胞基因的转录与表达及参与病毒受体结合的重要成分，在病毒粒子的成熟和包装中起重要作用［6-8］，因此，以ORF2为靶基因筛选与之互作的蛋白具有重要意义。

酵母双杂交系统是基于转录因子对细胞内蛋白质相互作用进行筛选与鉴定的系统，已被广泛应用于病毒与宿主的互作研究［9-10］。本研究利用实验室分离到的HAstV-1型1d亚株作为模板，将病毒衣壳蛋白ORF2基因成功克隆到酵母双杂交表达载体pGBKT7中，并以ORF2作为诱饵蛋白，从人结肠癌细胞Caco-2 cDNA文库中初步鉴定与ORF2存在相互作用的宿主蛋白，为进一步研究ORF2的生物学功能及参与病毒致病性等方面奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

HAstV-1d病毒株、人Caco-2 cDNA 文库、Caco-2细胞、pMD-18T-ORF2质粒为本实验室保存。……