高脂饮食致非酒精性脂肪性肝病大鼠小肠、肝脏中NOD 样受体蛋白3及相关炎症因子的表达*

夏恩蕊，张素妍，田格格，李 浩，杜玉锐，张顺贞

（云南中医药大学中药学院，云南 昆明 650500）

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤，疾病谱包括非酒精性肝脂肪变、非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）、肝硬化和肝细胞癌[1]。随着肥胖发病率的增加，NAFLD 已成为全球关注的主要健康问题之一。NLRP3 是一种模式识别受体（PRRs），隶属于NOD 样受体家族（NOD-like receptor，NLRs），是NLRP3 炎症小体的组成部件之一[2]。在病原体相关分子模式（PAMPs）或损伤相关分子模式（DAMPs）的刺激下，NLRP3 可出现上调，启动炎症小体的组装，介导大量IL-18、IL-1β 的释放[3-5]。NAFLD 上调肝脏中NLRP3，进而诱导IL-18、IL-1β 的增加[6]，这一过程是单纯脂肪肝进展到NASH 及肝纤维化的关键因素之一[7]。本研究旨在探讨NAFLD 模型大鼠小肠、肝脏中NLRP3 及相关炎症因子表达情况。

1 材料与仪器

1.1 动物 SD 雄性大鼠（180～220 g）20 只［购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（湘）2016－0002，实验单位使用许可证编号：SYXK（滇）K2013－0002］。

1.2 试剂 高脂饲料（82.5%普通饲料、10%猪油、2%胆固醇、0.5%胆酸钠、5%蛋黄粉）[8]。普通饲料由楚商生物有限公司提供。

ALT、AST、IL-18、IL-1β、脂多糖ELISA 试剂盒（上海酶联生物科技有限公司，MM-0047R）。TC、TG生化试剂盒（南京建成，20190824）。Ultrapure RNA Kit RNA 提取试剂盒（康为世纪，CW0581S）；HiFiScript cDNA Synthesis Kit（康为世纪，CW2569M）；UltraSYBR Mixture（康为世纪，CW0957M）。NLRP3 抗体（abcam，ab214185）、SP 免疫组化试剂盒（中杉金桥科技公司，2004C1009）、DAB 显色试剂盒（中杉金桥科技公司，2024G0331）。

1.3 仪器 垂直板电泳装置（TanonVE－180P RE）、垂直板电泳胶转膜仪装置（Tanon VE－586）、荧光定量PCR 仪（Heal Force，CG）、石蜡切片机（Thermo，Finesse 325）、显微镜（奥林巴斯，CX23）。

2 方法

2.1 动物分组及取材 将20 只SD 雄性大鼠随机分为2 组，即正常组、高脂饮食组，每组各10 只。正常对照组给予普通饲料，高脂饮食组给予高脂饲料。……