miR-409-3p通过调控SLBP影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

周 杰，李敬东，权 刚，孙 骥，岳 亮

1.川北医学院附属医院肝胆一科，四川 南充 637000；2.成都中医药大学医学与生命科学学院

肝癌是临床常见恶性肿瘤之一，其发病率与死亡率较高，患者5年生存率较低[1-4]。miR-409-3p是一种在胃癌等几种癌症中表达下调的miRNA，并通过增殖、分化等生物学过程参与肿瘤进展调控[5]。生物信息学分析显示，茎环结合蛋白(stem-loop binding protein，SLBP)与miR-409-3p存在靶向结合序列，资料显示SLBP表达在骨肉瘤[6]、乳腺癌[7]等肿瘤中被上调，并可参与肿瘤细胞生长及转移过程。本研究主要探讨miR-409-3p、SLBP在肝癌细胞系中的表达，分析miR-409-3p在肝癌细胞增殖、迁移及侵袭中的作用，并结合其对SLBP的调控旨在揭示肝癌中miR-409-3p的机制，为阐明肝癌病理进展的分子机理提供新的启示。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂肝癌组织及癌旁组织来源：选取2017年5月至2018年6月我院收治的30例肝癌患者为研究对象，所有患者均经病理证实为肝癌，男20例，女10例，年龄(56.35±12.36)岁(40～70岁)，所有患者均于术中切除肝癌组织及癌旁组织，置于-80 ℃超低温冰箱保存。

人肝上皮细胞(THLE-3)、肝癌细胞系(MHCC97H、Hep3B、SK-HEP-1)购自美国ATCC。Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；miR-409-3p寡核苷酸模拟物(miR-409-3p mimics)、miR-409-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-409-3p)、SLBP小干扰RNA(si-SLBP)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、抑制剂NC序列(anti-miR-NC)、乱序无意义小干扰RNA序列(si-NC)购自广州市锐博生物科技有限公司；反转录试剂盒、SYBR Green试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；MTT与DMSO购自美国BD公司；凋亡试剂盒购自美国Sigma公司；兔抗人SLBP抗体购自美国Abcam公司；兔抗人细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、兔抗人基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2，MMP2)、兔抗人基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases9，MMP9)抗体购自美国Santa Cruz公司；……