1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

梅 力，王英超，程汝佳，于国际，范学政，高晓龙，高 敏，秦玉明，李筱英，李巧玲，朱良全*，冯小宇*

(1.北京市动物疫病预防控制中心，北京 102629； 2.中国兽医药品监察所，北京 100081)

布鲁氏菌病(Brucellosis)，又称波浪热，是由布鲁氏菌(Brucella)感染所引起的一种细菌性人兽共患传染病[1-2]，世界动物卫生组织(Office International des Epizooties，OIE)将其列为 B 类动物疫病[1]，猪、牛、羊等普通家畜均易感该病，人主要是通过接触病畜或食用被布鲁氏菌污染的食物而感染。该病主要发生在内蒙古、东北等地的牧区[3]，近年来，我国布病疫情虽然基本得到控制，但多点散发的情况依然存在，给畜牧业和公众健康造成严重威胁。

目前，针对布鲁氏菌的检测方法很多，其中，细菌的分离鉴定是布病诊断的“金标准”，该方法主要是以病料的组织、生殖道分泌物、血液等作为可培养物进行布鲁氏菌的分离鉴定[1,4]，但细菌分离鉴定操作繁琐，所需时间较长，且对试验技术人员的危险较大；PCR、荧光定量PCR等技术目前已经应用于布鲁氏菌的检测，但这些方法的灵敏度还有待提高，特别是在菌含量极低时可能会出现假阴性或可疑结果，因此有必要建立一种高灵敏度的方法，从而有效提高布鲁氏菌检测的精确度。

微滴式数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)目前已被应用于病原微生物检测、肿瘤相关基因检测等多个领域[5-6]。ddPCR将一个待分析的PCR 反应体系进行微滴化处理，每个微滴中含有一个、多个或不含有待检测的核酸靶分子，数万个微滴进行独立PCR 扩增反应后，对每个微滴的荧光信号进行统计学分析，含有荧光信号的微滴判读为1，不含荧光信号则判读为0，从而实现对病原体DNA或RNA的绝对定量[7]。……