miR-497抑制人结肠癌细胞血管生成及迁移侵袭能力的研究

刘少平，胡亚华，张 海，章国星，卫银芝

1.鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)全科医学科，湖北 黄石 435000；2.武汉科技大学职业危害识别与控制湖北省重点实验室;3.鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)消化内科

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是新生血管丰富的实体肿瘤，活跃的血管生成能力和转移能力是其两大重要特征。新生血管不仅供给肿瘤快速生长所需的充足养分，而且成为其转移的重要通道[1-4]。近年研究发现，miR-497在肿瘤发生发展过程中发挥抑癌基因的作用，其表达水平的改变能够调节肿瘤发生发展相关的重要生物学事件，包括细胞增殖、分化、周期、凋亡、上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)、血管生成、迁移、侵袭等[2-7]。近年研究显示，miR-497通过作用VEGF-A/ERK/MMP-9信号通路中关键分子、靶向作用胰岛素受体底物1、抑制EMT等途径，在CRC血管生成中发挥了重要作用[3-5]。本实验探讨miR-497对人结肠癌细胞血管生成和迁移侵袭能力的作用影响。

1 材料与方法

1.1 细胞及主要试剂人结肠癌细胞株HT-29、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)由武汉大学中南医院肿瘤实验中心馈赠。脂质体LipofectamineTM2000购自Invitrogen公司；化学合成的miRNA mimic micrONTMhsa-miR-497 mimic及其阴性对照miR-NC购自广州市锐博生物科技有限公司；DMEM高糖培养基和胎牛血清购自Gibco公司；孔径8 μm的24孔和96孔Transwell板购自美国Corning公司。Matrigel基质胶购自美国BD公司。VEGFA ELISA检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司；抗-VEGFA抗体购自Proteintech公司；抗-GAPD抗体购自上海联迈生物工程有限公司。其他生化试剂均为国产分析纯试剂。

1.2 细胞培……