lncRNA SND1-IT1靶向miR-185-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

艾合买提江·艾海提 谢有强 陈智全

我国是胃癌高发国家之一，尽管手术、放化疗、分子靶向治疗等治疗手段不断提高，胃癌患者的生存率仍不令人满意[1,2]。近年来，许多原癌基因和抑癌基因被证实在胃癌的发生发展中起着重要作用。因此，进一步阐明胃癌发生转移的分子机制对提高胃癌患者的诊断、治疗和预后具有重要意义。长链非编码RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)是新近发现非编码RNA家族成员，其长度>200 nt并缺乏蛋白编码功能[3]。研究表明，lncRNAs通过在不同程度上调控基因表达，参与对胃癌细胞增殖、细胞周期、凋亡、侵袭、迁移、转移和致瘤性等过程的调控[4,5]。lncRNA葡萄球菌核酸酶结构域包含蛋白1内含子转录本1(Staphylococcal nuclease and Tudor domain containing 1 gene intron transcript 1，SND1-IT1)是新近发现的一种lncRNA，研究显示lnc SND1-IT1高表达可提高骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力[6]。但SND1-IT1在胃癌进展中的作用尚不明确。因此，本研究通过观察lnc SND1-IT1在胃癌中的表达及其生物学作用，揭示其分子机制，为胃癌的治疗提供潜在策略。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人胃黏膜上皮正常细胞GES-1、胃癌细胞AGS、HGC-27和Hs 746T购于中国科学院上海细胞库；DMEM、F-12、RPMI-1640、胎牛血清、青链霉素溶液购于美国Hyclone公司；lnc SND1-IT1小干扰RNA(si-lnc SND1-IT1)及其对照(si-con)、miR-185-5p模拟物(miR-185-5p mimics)及其对照(miR-con)、miR-185-5p抑制物(anti-miR-185-5p)及其对照(anti-miR-con)、lnc SND1-IT1过表达载体(pcDNA-lnc SND1-IT1)及其对照(pcDNA)、PCR引物由上海吉玛制药有限公司完成；TRIzol试剂、Lipfectamine 2000购于美国Ivitrogen公司；细胞计数试剂盒8(cell count kit 8，CCK-8)、放射免疫沉淀测定(radioimmunoprecipitation assay，RIPA)裂解液购于上海碧云天生物科技有限公司；Transwell小室购于美国BD公司；兔抗人细胞周期素D1(CyclinD1)抗体、兔抗人周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2，CDK2)抗体、兔抗人基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)抗体、兔抗人MMP-9抗体、山羊抗兔IgG购于美国Abcam公司。