高效液相色谱法测定叶下珠没食子酸含量的研究*

唐 艺，李 昆，许 斌，陈舒忆

(贵阳市食品药品检验检测中心,贵州 贵阳 550081)

叶下珠为大戟科植物叶下珠Phyllanthusurinaria Linnaeus 的干燥全草，有平肝清热、利水解毒的功效[1]，临床上，叶下珠多用于慢性乙型病毒性肝炎的治疗[2]。叶下珠的活性成分较多，其中没食子酸含量最高，有抗炎、抗突变、抗氧化、抗肿瘤活性。本文对叶下珠的含量测定方法进行研究，为叶下珠的质量控制提供一定的依据。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪Agilent1260，安捷伦；电子天平BSA224S，赛多利斯；水浴锅DFD-700，天津市泰斯特；没食子酸对照品(批号：110831-201605)，中国食品药品检定研究院。色谱纯甲醇(4 L/瓶)，默克化工技术；盐酸、磷酸(500 mL/瓶)，国药集团化学试剂。

1.2 实验材料

10批不同产地的叶下珠(见表1)，采集部位均为全草，并由贵州中医药大学药学院魏升华教授鉴定为大戟科叶下珠属植物叶下珠Phyllanthusurinaria L.。

1.3 实验方法

1.3.1 液相色谱条件

InretSustain C18色谱柱(4.6×250 mm，5.0 μm)，甲醇-0.2%磷酸溶液(12:88)为流动相，流速1 mL/min，进样量10 μL，柱温25 ℃，检测波长273 nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。

1.3.2 溶液的制备

取叶下珠粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入15%盐酸溶液50 mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用15%盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1 mL，用50%甲醇定容至10 mL，得供试品溶液。取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含20 μg的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱中测定，按外标法以峰面积计算。

2 结果与讨论

2.1 提取条件的选择

通过查阅药典，没食子酸的含量测定的前处理方法有两种方式，甲醇提取和盐酸溶液提取。……