PHPS1促进ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的不稳定性研究

李新新，马倩，谭鹤，刘美霞，李静，张雪，路永刚，帖彦清

以动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)病变为基础的心肌梗死、脑卒中等疾病是常见病、高发病，致死率和致残率非常高[1]，因此研究AS具有极高临床价值。内质网具有折叠、修饰和降解膜结合蛋白的功能，内质网内腔累积的未折叠或错误折叠的蛋白质会引发内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)，从而导致未折叠蛋白反应(unfolded protein reaction，UPR)，其与多种人类常见疾病的发生和发展有密切联系，是近年来研究的热点[2-4]。研究表明，内质网应激通过不同信号通路在炎性反应、血脂、内皮细胞、巨噬细胞表型转换和血管钙化等多个方面参与了AS的发生发展[5-7]。鉴于内质网应激具有同时促进炎性反应和促进凋亡的特征，蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2(Src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase，SHP-2)对内质网应激和斑块内细胞凋亡的影响尚不清楚，本实验采用灌胃方式利用苯肼基吡唑啉酮磺酸盐1(PHPS1)特异性抑制ApoE-/-小鼠SHP-2，观察其对内质网应激和动脉粥样硬化斑块稳定性的影响，从而探讨SHP-2与内质网应激和细胞凋亡的关系，揭示其在动脉粥样硬化发展中的作用，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)动物： 6～8周龄ApoE-/-小鼠18只，购自常州卡文斯实验动物公司，体质量(21±2)g，饲养于SPF级环境中，室温保持在(22±0.2)℃，给予1.25%胆固醇高脂饲料饲养，不限食水，温度、湿度、光照均采用自动控制系统。本实验符合动物伦理委员会要求。(2)试药试剂：巨噬细胞单克隆抗体CD68(Abcam公司)；平滑肌抗体α-SMA(武汉博士德生物工程有限公司)；TUNEL试剂盒、ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)；天狼猩红染色试剂、Movat染色试剂盒、BCA试剂盒(北京索莱宝试剂有限公司)；……