受体交互作用蛋白激酶1抑制剂necrostatin-1治疗狼疮性肾炎的实验研究

朱 妍 彭 琳 张明超 王荔枝 徐孝东 曾彩虹 秦卫松 刘志红

狼疮性肾炎(LN)是系统性红斑狼疮(SLE)的常见临床表现,是我国常见的继发性肾小球疾病之一,也是患者死亡的主要原因,约10%的LN患者最终发展为终末期肾病(ESRD)[1-2]。LN的致病机制尚不明确,绝大多数LN患者肾脏中可见免疫球蛋白和补体成分沉积于肾小球和肾小管,伴内皮细胞、系膜细胞和基膜损伤等[3]。目前以激素和免疫抑制药物联合治疗为主,除了贝利木单抗(一种B淋巴细胞刺激因子的特异性抑制剂),其他生物制剂和小分子靶向抑制剂仍有待研发[4]。坏死性凋亡是一种新发现的程序性细胞坏死,与凋亡不同,坏死性凋亡细胞会释放细胞内容物,激活巨噬细胞、成纤维细胞和内皮细胞,导致免疫和炎症反应[5]。肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)介导的坏死性凋亡是最广泛最常见的途径,其中受体交互作用蛋白激酶(RIPK)1作为分子平台,参与多条信号通路[6]。RIPK1去泛素化时激活依赖半胱氨酸蛋白酶(caspase)的促凋亡级联反应,当caspase8受抑制时,RIPK1、RIPK3和混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)共同形成坏死小体,此时MLKL磷酸化,插入胞膜,破坏细胞膜完整性,导致细胞发生坏死性凋亡[7]。necrostatin-1(Nec-1)是经典的RIPK1小分子抑制剂,已在多种动物模型中得到了广泛验证[8]。本研究借助LN样小鼠和体外系膜细胞,观察Nec-1治疗LN的疗效。

材料与方法

主要试剂与仪器磷酸化(S166)RIP1抗体(美国CST公司),RIP1抗体(美国CST公司),磷酸化(S358)MLKL抗体(美国Abcam公司),MLKL抗体(美国CST公司),Nec-1(Selleck公司),流式细胞仪(型号 FACS ARIA)。

实验对象和分组实验动物 MRL/lpr小鼠13只,雌性,SPF级,购自南京模式动物所,放置于东部战区总医院SPF级动物房进行饲养,正常饮食,采用明暗各12h照明。……