荧光PCR熔解曲线法在非结核分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值

李爱芳 谈小文 崔晓利 康磊 党丽云 张耀辉 杨翰

非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria，NTM)是指除结核分枝杆菌复合群及麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌总称[1]。NTM感染常可引起肺部疾病，且NTM肺病的临床症状有与结核病相似的全身中毒症状和局部损伤表现，因而容易造成误诊而耽误治疗。由于大部分NTM对常用抗结核药物普遍具有耐药性，且不同NTM对药物的敏感性也不相同，NTM肺病患者在全世界范围内呈上升趋势，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题[2-3]。因此，临床上对分枝杆菌的快速鉴定意义重大。

随着实验室检测技术的不断进步，越来越多的分子生物学方法应用于分枝杆菌快速鉴定，如DNA探针杂交、DNA测序、基因芯片技术等[4-7]。目前，国内实验室主要采用传统的细菌学分类方法进行菌种鉴定，但这种方法操作繁杂、费时，不适用于临床快速诊断。近年来，基因芯片法因其多样品、高通量等优点逐渐成为临床最常用的菌种鉴定方法；而16S rRNA基因测序法鉴定NTM快速准确，是鉴定分枝杆菌比较权威的方法[8]。荧光PCR熔解曲线法是一种简单、快速用于菌种鉴定的分子生物学方法，该方法根据不同分枝杆菌基因转录间隔区(intergenic transcribed spacer，ITS)片段的特异序列设计探针，采用特定的荧光通道和熔点进行分枝杆菌鉴别。荧光PCR熔解曲线法使用荧光PCR仪及配套软件即可进行检测和结果分析，与16S rRNA基因测序法相比，对仪器和实验人员技术要求更低，价格也更便宜，适宜临床常规开展。本研究采用荧光PCR熔解曲线法、基因芯片法及16S rRNA基因测序法进行分枝杆菌菌种鉴定，评价荧光PCR熔解曲线法的检测效能。……