利用民猪耳缘组织重复培养成纤维细胞的研究

王春安，狄生伟，付德昌，郑 鹏

（1 黑龙江昇太牧业发展有限公司，黑龙江 兰西 151500；2 东北农业大学 动物科学技术学院，哈尔滨 150030）

中国是世界第一养猪大国，具有丰富的猪种资源，中国的猪种资源对世界的养猪生产和猪的育种都具有重要意义。然而由于各种原因，有些地方猪种数量急剧下降，甚至绝种，因此，亟需加强地方猪种的活体保存及利用生物技术保存种质资源［1-3］。

民猪是中国东北地区一个古老的地方猪种，具有产仔多、肉质好、抗寒、耐粗饲的突出优点［4］，是受保护的国家级地方品种。可以采用细胞培养技术从细胞水平保存民猪这一重要遗传资源。

利用猪的耳缘组织培养成纤维细胞是一种操作简单、常用的方法，为了在动物组织块的再利用、遗传资源的保存中探索一种新的保存方法，试验在采用植块法培养民猪耳缘组织成纤维细胞的基础上，进一步探讨了组织块的再培养和冷冻保存后再培养的方法，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验动物

民猪，为饲养在黑龙江省兰西县种猪场（黑龙江昇太牧业发展有限公司）内的保种种猪，按照饲养标准饲喂，自由饮水。按照家系、个体之间没有亲缘关系进行选择，共采集45头民猪耳缘组织。

1.2 主要试剂

DMEM/F-12、胎牛血清（FBS），购自HyClone公司；双抗，为100×青霉素-链霉素溶液，100 mL装，每毫升含10 000 U 青霉素和10 mg 链霉素，Biosharp 公司产品；其他试剂如无特殊说明，均购自Sigma公司。

细胞培养基：DMEM/F-12+15%FBS+1%双抗（10 mg/mL的青霉素和链霉素）。消化液：0.25%胰蛋白酶（Amresco）。细胞冻存液：DMEM/F-12+15%FBS+10%二甲基亚砜（DMSO）+1%双抗。……