高致病性禽流感检测方法的分析比对

文│张亦弛 吕艳秋 高晓波（北京市昌平区动物疫病预防控制中心）

高致病性禽流感是一种能引起禽类短时间内大量死亡的人畜共患病，是国家规定的一类动物疫病，它的流行对养殖业造成非常大的伤害。高致病性禽流感病毒为单股负链RNA，依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白，可分为H5亚型和H7亚型，其中H7N9和H5N1为目前我国常见的亚型。能够快速准确且便宜地诊断出高致病性禽流感是目前我国基层兽医检测部门的工作重点之一。本实验主要选用了目前商品化的禽流感检测方法进行了诊断方面的比较，为临床工作中能够高效检测禽流感病毒提供参考。

一、试验样品及采集方法

2018年，北京市昌平区某鸡场送检30只鸡的30份血清样品和对应的60份咽肛拭子样品。血清样品为采集翅静脉血后25℃温箱3小时静置后自然分离，用于血凝抑制（HI）试验；咽肛拭子一份为用棉签分别擦拭咽壁和泄殖腔壁分泌物后立刻放入干净的空试管，用于胶体金试纸条试验；另一份为咽肛拭子采集分泌物后立刻放入含有3%甘油的磷酸缓冲盐溶液（PBS）的试管中低温保存，用于实时荧光定量PCR试验。

二、主要试剂和试验方法

1.血凝抑制（HI）试验。H7N9，H5N1-R7株，H5N1-R8株禽流感（AI）抗原及阳性血清由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生产。试验方法和判断依据按照GB/T18936-2020《高致病性禽流感诊断技术》进行：以完全抑制4个血凝单位抗原的血清最高稀释倍数为HI滴度，HI≤3log2为阴性，HI≥5log2为阳性，HI=4log2为可疑，复检后HI≥4log2为阳性。……