绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离与鉴定

凌芳，郝科兴，陈慧慧，龙德智，王静，胡广东

(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832000)

胚胎附植是妊娠成功的关键步骤,在早期胚胎附植阶段，子宫内膜会经历一系列结构和功能的变化，从而建立最佳的子宫内环境允许胚胎植入[1]。此过程也称子宫内膜蜕膜化，子宫内膜蜕膜化的实质是子宫内膜上皮细胞和基质细胞的增殖和凋亡过程[2-3]。为了更好地研究这一过程中母体子宫内膜变化的相关机制，需要可靠的细胞模型，而在体外分离培养原代子宫内膜上皮细胞和基质细胞是解决此问题的有效手段。

近年来，子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外分离培养方法建立的相关研究在不同动物上均获得成功，包括人[4]、小鼠[5]、家兔[6]、牛[7]、山羊[8]等，涉及细胞分离培养的方法有组织培养法和酶消化法。然而，在实际操作过程中，利用上述方法分离获得的细胞均为子宫内膜上皮细胞和基质细胞的混合细胞，难以完全分离纯化。因此，本研究采用组织块培养法获得原代绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞，再通过胰酶差时消化法获得纯化的原代细胞，并分别对其进行免疫荧光鉴定，以期建立一种绵羊子宫内膜上皮细胞和基质细胞获取方法及分离纯化方法，为更好地研究绵羊胚胎附植过程提供可靠的细胞模型。

1 材料与方法

1.1 试验动物

绵羊子宫采自新疆石河子市牛羊定点屠宰场，动物经过严格的健康检疫流程，符合试验要求。

1.2 试剂

胎牛血清(FBS)、DMEM/F12 培养基、0.25%胰蛋白酶购自Gibco；……