二甲双胍联合顺铂对黑色素瘤细胞的抑制作用及其机制研究

祁冰洁 任 煜 刘婷婷 刘慧娟 严其高 任丽英

安庆医药高等专科学校药学系 安徽安庆 246052；①教务处

化学药物辅助治疗在恶性黑色素瘤的治疗中具有重要的地位，对于存在高危因素的早期患者或处于病程中晚期的患者来说，应用于围术期可提高治疗效果[1]。顺铂是临床上多种化疗方案的主要药物之一，具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用[2]；二甲双胍可通过激活相应的信号通路抑制癌细胞的增殖[3]。本研究旨在探讨二甲双胍联合顺铂对恶性黑色素瘤细胞的抑制作用及其相关机制。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验细胞 小鼠恶性黑色素瘤细胞B16细胞株购于上海粒成生物科技有限公司。

1.1.2药物及试剂 顺铂(齐鲁制药有限公司，批准文号：20140372)，二甲双胍(美国Sigma公司，批准文号：20120056)，甲羟孕酮(美国Sigma公司，批准文号：23020715)。Bcl-2、Bax的反转录聚合酶联反应(RT-PCR)试剂盒、胎牛血清、胰蛋白酶购于上海生工有限公司，噻唑蓝(MTT)试剂盒购于美国eBscience公司，RNA提取试剂盒、反转录试剂盒购于美国Sigma公司，Bcl-2、Bax一抗购于碧云天生物科技研究所。

1.1.3仪器 PCR仪(Light Cycler 480，美国)，超净工作台(HEAR GU ARD ECO，苏州净化设备厂)，蛋白电泳仪、转膜仪(BIO-RAD公司)，紫外分光光度计(上海仪天科学仪器有限公司)。

1.2细胞处理及分组 应用胰蛋白酶将实验细胞消化为单细胞悬液，加入96孔板中，每孔180μL，细胞浓度为1×104个/孔。设空白组、对照组、给药组A、给药组B、给药组C、给药组D、给药组E。5% CO2、37℃下孵育12h，给药组A、B、C、D、E分别加入稀释后的二甲双胍和顺铂混合物(20μL)室温处理24h，具体给药浓度见表1。

表1 二甲双胍联合顺……