LINC00087靶向miR-519d-3p对胶质瘤细胞增殖凋亡的影响

刘恩智 邵晓光 盛巍 李勐

胶质瘤(glioma)是常见的原发性颅内恶性肿瘤，其中胶质母细胞瘤是最恶性的形式(WHO IV级)，并以治疗耐药性而臭名昭著[1]。发现胶质瘤的抑制基因，开发更为个性化的精准靶向治疗方法对胶质瘤患者的治疗具有重要意义[2]。研究表明，长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)可能与微小RNA(microRNA，miRNA)相关作用，通过MAPK、p53、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT/mTOR和上皮间质转化(EMT)等信号通路的激活参与了胶质瘤的生长和进展[3]。研究表明，长基因间非编码RNA00087(LINC00087)在神经胶质瘤组织中高表达，可能是疾病的预后指标或治疗靶点[4]。本研究通过TargetScan预测发现，miR-519d-3p与LINC00087存在结合位点。miR-519d-3p在胶质瘤组织和细胞系中的表达显著降低，miR-519d-3p的过表达抑制细胞增殖并诱导细胞周期G0/G1期阻滞[5]。但LINC00087和miR-519d-3p在胶质瘤中的关系目前还尚不清楚。本研究检测胶质瘤组织中LINC00087的水平，然后以人胶质瘤细胞系U251为主要研究对象，检测LINC00087和miR-519d-3p对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 一般情况：选取2018年1～12月于我院病理检查确诊为胶质瘤的患者手术切除的胶质瘤组织共45例，其中男25例，女20例；年龄19～69岁，平均年龄(46.0±12.2)岁；病理级别：WHO Ⅰ～Ⅱ级24例，Ⅲ～Ⅳ级21例。患者术前未接受放疗和化疗。同时选择40例志愿者(脑外伤行颅内减压手术患者)正常脑组织作为对照。

1.1.2 仪器与试剂：人胶质瘤细胞株U251购自美国ATCC；胰蛋白酶、RNA提取试剂Trizol购自美国Sigma-Aldrich公司；DMEM高糖培养液培养基、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)购自美国Gibco公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司，Real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)购自宝生物工程(大连)有限公司；CCK8检测试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；……