大豆北方茎溃疡病菌荧光RAA检测方法的建立

陈吴健，范宇博，严颖鹏，林晓佳，任琰，吴志毅，程帆，郭利川，应清界

(1.杭州海关技术中心，浙江 杭州 310016；2.江苏奇天基因生物科技有限公司，江苏 无锡 214000)

大豆茎溃疡病是由大豆茎溃疡病菌感染大豆所引起的疾病，大豆茎溃疡病分大豆北方茎溃疡病和大豆南方茎溃疡病，其病原体分别为大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthephaseolorumvar.caulivora，DPC)和大豆南方茎溃疡病菌(Diaporthephaseolorumvar.meridionalis，DPM)，DPC属子囊菌门、球壳目、间座壳科、间座壳属。该病菌侵染植株后迅速发展形成茎杆环状损伤，并可导致正在生长的植株死亡。发病严重的田块有80%的植株受到侵染，造成严重的经济损失。在美国、阿根廷、巴西、加拿大、巴拉圭、意大利、前南斯拉夫、克罗地亚等欧洲部分国家及地区有发生报道，是国外大豆生产上的重要病害[1]。

2005年，我国首次从美国进境大豆发现有大豆北方茎溃疡病菌[2]，进境大豆携带大量的豆杆、豆荚及其他杂质，带菌的可能性很大。在进境大豆的运输、加工、下脚料的处理过程中都有传播扩散的可能，一旦传入将对我国大豆生产造成严重影响。由于传入风险高，我国绝大部分地区都适合该病菌生长[3]，因此，被我国列为检疫性有害生物，由此亟需一种快速简便的方法应对口岸进出粮谷的检测。

重组酶介导扩增(recombinase aid amplification，RAA)是一种新的在恒温下可以快速扩增核酸的技术，RAA扩增法采用来自于大肠杆菌的recA重组酶，利用其在常温下可以与DNA紧密结合的特性，并结合引物形成聚合体扫描双链DNA，在与引物同源的序列处使双链DNA解旋。……