COPD大鼠膈肌肌肉生长抑制素mRNA表达和凋亡的相关性研究

于海明，周 煦，裴兴华，卢 武，肖 彦，吴艳红

（湖南省人民医院重症医学科，长沙 410005）

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种以进行性气流受限和肺功能丧失为特点的慢性炎症反应性疾病［1］，是全球死因第三名的疾病。COPD常累及全身骨骼肌系统，尤其是呼吸肌，呼吸肌消耗及功能障碍引起的呼吸衰竭是COPD患者晚期死亡的最重要原因［2］。膈肌是最主要的呼吸肌，约占全部呼吸功能的60-80%［3］。肌肉生长抑制素（myostatin），又称为生长分化因子8（GDF-8），是转化生长因子-β（TGF-β）超家族成员，主要表达于骨骼肌，抑制肌肉的生长发育，参与骨骼肌的消耗和功能障碍［4］，在许多消耗性疾病或年龄增长所引起的肌肉萎缩中均发现myostatin增高［5］。COPD时同时存在膈肌萎缩和凋亡，但膈肌myostatin表达是否与膈肌凋亡萎缩相关尚不明确。本研究将通过单纯熏香烟法复制大鼠COPD模型，检测膈肌组织myostatin mRNA表达和凋亡萎缩情况，探讨二者之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 实验动物8周龄雄性SD大鼠，体重200～250g，购于湖南斯莱克竞答实验动物有限公司，动物许可证编号：SCXK（湘）2015-0013。

1.2 主要实验试剂芙蓉牌香烟（焦油12mg/支）购自湖南中烟工业有限责任公司，瑞氏-姬姆萨染色液购自珠海贝索生物技术有限公司，Trizol购自Invitrogen公司，逆转录试剂盒和PCR试剂购自Fermentas公司，原位细胞凋亡检测（TUNEL）试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司，引物序列由上海生工公司合成。

1.3 动物分组和模型SD大鼠通过随机数字法分为正常对照组（n=8）和COPD组（n=8）。COPD大鼠模型建立：采用单纯熏香烟法制备COPD模型［6］，烟雾暴露箱（72.8cm×52.4cm×45.8cm）：由整理箱改装而成，利用有机玻璃将箱体分隔2层，上2/3为烟雾暴露区，下1/3为燃烟区，箱盖、箱底及隔面均有数个1cm×1cm大小的通气孔。……