藏猪脾脏转移因子对小鼠抗氧化作用的研究

叶兵兵　杨莹湘　张辉梅　倪萍　刘登波

摘要：为了研究藏猪脾脏中转移因子（TF）的抗氧化作用，试验选择20只小鼠（雌雄各半），随机分为药物组和对照组（每组10只），药物组注射TF，对照组注射等量生理盐水，检测小鼠部分组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果表明，药物组小鼠脾脏SOD活性与对照组相比显著降低（P<0.05），其他组织中SOD活性无显著差异（P>0.05）。药物组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏MDA含量均显著低于对照组（P<0.05），肾脏MDA含量与对照组相比差异不显著（P>0.05）。说明藏猪脾脏TF能增强其机体清除自由基的能力。

关键词：藏猪;脾脏;转移因子（TF）;抗氧化性

中图分类号：S828        文献标识码：A        文章编号：1007-273X（2021）04-0010-02

自从1995年Lawrence发现转移因子（Tansfer factor，TF）以来[1]，人们对转移因子的研究越来越广泛。TF是来自于具有细胞性免疫功能的淋巴细胞产生的一类可透析的小分子多肽类物质，其分子质量小，含多种氨基酸，可提高机体免疫活性，并且还可以诱导靶细胞产生大量的细胞因子，实践中经常用于免疫缺陷病以及感染性疾病防治[2，3]。

抗氧化（vAnti-Oxidant）是指抗氧化自由基的简稱，抗氧化是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，机体在产生自由基的同时，也产生着抵抗自由基的抗氧化物质。超氧化物歧化酶（SOD）是调节机体自由基代谢的重要酶。丙二醛（MDA）含量可衡量机体内自由基的代谢情况[4]。本试验以甘孜州藏猪脾脏为原料，提取藏猪脾脏TF，给小鼠注射后测定其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏中SOD和MDA含量，检测其抗氧化能力，以为藏猪脾脏TF的进一步利用提供一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料 藏猪脾脏采集于四川省甘孜州姑咱镇屠宰场。

1.1.2 试验动物 昆明系小鼠20只（雌雄各半），体重为18～22 g。由成都达硕实验动物有限公司提供。

1.1.3 主要试剂 SOD试剂盒、MDA试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 TF的制备 采用冷冻-透析法制备TF，-20 ℃保存备用。

1.2.2 动物分组及处理 适应性饲养3 d后将20只健康小鼠随机等分为药物组和对照组。在无菌条件下分别注射TF和无菌生理盐水，即药物组小鼠每天腹腔注射TF 0.2 mL，对照组小鼠每天腹腔注射生理盐水0.2 mL，持续15 d。

1.2.3 组织匀浆的制备 注射15 d后脱颈椎处死小鼠，取小鼠心、肝、脾、肺、肾各0.1 g，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，量筒量取该组织块9倍质量预冷的生理盐水，玻璃匀浆器充分研碎，即得组织匀浆，匀浆后3 500 r/min离心12 min，取上清液备用。

1.2.4 组织匀浆中各物质含量的测定 按照相应试剂盒说明书分别测定小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏中SOD和MDA含量。

（1）SOD活力测定。使用黄嘌呤氧化酶法。

[SOD活力（U/mg）=对照OD450 nm-测定OD450 nm对照OD450 nm]

÷50%×反应体系稀释倍数[0.24 mL0.02 mL]÷待测样本蛋白浓度（mg/mL）

（2）MDA活力测定。采用TBA法。

组织中MDA含量（nmol/mgprot）=

[测定OD532 nm-对照OD532 nm标准OD532 nm-空白OD532 nm]×标准品浓度[（10 nmol/mL）÷待测样本蛋白浓度（mgprot/mL）]

1.2.5 数据的统计分析

采用SPSS软件进行统计分析，结果以平均值±标准差表示，组间比较采用t检验。

2 结果与分析

2.1 藏猪脾脏TF对小鼠组织中SOD活性的影响

由表1可知，药物组小鼠脾脏SOD活性较对照组显著降低（P<0.05），小鼠其他组织中SOD活性两组差异不显著（P>0.05）。

2.2 藏猪脾脏TF对小鼠组织中MDA含量的影响

由表2可知，药物组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏MDA含量显著低于对照组（P<0.05），肾脏MDA含量两组差异不显著（P>0.05）。

3 小结与讨论

制备非特异性TF应选用成年或细胞免疫功能正常或较强的畜禽作供体[5]。本试验以甘孜州特有物种藏猪脾脏为原料，经匀浆、冻融、透析获得藏猪脾脏中的TF，程序简单，可以将藏猪脾脏变废为宝，为动物抗病力及疫病防治工作提供新的途径和工具。

TF作为一种特定的淋巴细胞因子，参与机体的免疫功能。TF通过活化巨噬细胞，能特异性和非特异性地增强机体免疫功能。它能使正常的未致敏的T淋巴细胞转化为致敏的T淋巴细胞。因此TF可以增强细胞的免疫应答，增强机体的抗病能力和促使自身免疫病的康复。常建军等[6]研究表明，牦牛转移因子有增加其细胞免疫的作用。蒋小武等[7]研究表明，鹅脾脏转移因子粗提液对增强机体的免疫力具有一定作用。

SOD是生命机体中存在的一种活性酶，是机体内清除自由基的重要物质。MDA产生的量与机体内自由基的水平有关，机体受自由基攻击的程度越严重即MDA的含量越高。本试验结果表明，药物组小鼠脾脏SOD活性显著降低（P<0.05），小鼠其他组织中SOD活性差异不显著（P>0.05）。药物组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏MDA含量显著低于对照组（P<0.05），肾脏MDA含量差异不显著（P>0.05）。MDA含量的显著降低反映机体受自由基攻击的程度下降，表明藏猪脾脏TF能增强机体清除自由基的能力。

参考文献：

[1] LAWRENCE H S. The transfer in humans of delayed skin sensitivity to streptococcal M substance and to tuberculin with disrupted leucoeytes[J]. Clin Invest，1955，34（2）：219-230.

[2] 郭成留，程会昌.动物转移因子及其研究进展[J].河南农业科学，2003（6）：46-48.

[3] 叶兵兵，李富桂.鸡转移因子脂质体对小鼠巨噬细胞吞噬功能及肠绒毛长度的影响[J].中国畜牧兽医，2013，41（1）：130-132.

[4] 宁 鹏，张 寿，尚海忠，等.牦牛胎盘抗氧化作用的研究[J].安徽农业科学，2009.37（18）：8501-8502.

[5] 张 玲，胡庭俊，陈炳全.马尾藻多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖及氧化应激影响的实验观察[J]，西南农业学报2011，24（5）：1967-1971.

[6] 常建军，文 英，李 莉，等.牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响[J].中国农学通报，2014，30（5）：38-40.

[7] 蒋小武，曾杨梅，朱乐欣，等.鹅脾脏非特异性转移因子的粗提取与活性鉴定[J].安徽农业科学，2012，40（5）：2710-2712.